扩增程序具体见图3,一方面AC1或RB-1a单独引物扩增出的较短非特异性靶产物(< 1kb)之间会自我配对,容易形成稳定的发夹结构,这种形式的发夹结构抑制PCR扩增;另一方面,Primary TAIL-PCR过程中使用了热不对称的PCR程序(程序中包含两个高退火温度与一个低退火温度),可以有效的降低AC1扩增出的非特异产物,见图 2C、2D。
热不对称交错PCR(thermalasymmetricinterlacedPCR,TAIL-PCR)是一种用来分离与已知序列邻近的未DNA序列的分子生物学技术。在分子生物学研究领域中,利用该技术分离出的DNA序列可以用于图位克隆、遗传图谱绘制的探针,也可以直接测序。该技术技术简单易行,反应高效灵敏,产物的特异性高,重复性好,能够在较短的时间内获得目标...
TAIL-PCR，即交错式热不对称PCR，也称为巢式PCR，是一种用于进行染色体步移的创新技术，被称为Genome Walking技术。这项技术的独特之处在于，它使用三个嵌套的特异性引物和简并引物进行连续的PCR循环。通过这种方式，可以利用不同的退火温度进行选择性扩增目标片段。所得到的片段可以直接用于探针标记和测...
在基因研究中，Tail PCR（末端 PCR）是一种用于获取 DNA 序列末端区域的常用方法。它的原理基于设计特定的引物，包括特异性引物和退火温度较低的兼并引物。首先，根据已知的 DNA 序列，设计三条同向的特异性引物。这些引物的退火温度较高，以确保它们的特异性。同时，设计一条或几条退火温度较低的兼并...
又叫热不对称交错PCR,能够较好地解决上述难题。 该技术通过3个嵌套的特异性引物(specialprimer,简称sp1,sp2,sp3,约20bp)分别和一个低Tm值的简并引物(Arbitrarydegenerate prime,AD,约14bp))组合进行连续的PCR循环,利用不同的退火温度选择性地扩增目标片段,所获得的片段可以直接用做探针标记和测序模板。 在利用特异...
adapteligation介导PCR和热不对称交错PCR已经开发扩增已知序列两端未知的DNA片段。TAIL-PCR式一种特有的PCR方法，一次特别适用于处理大量的样本手册或自动化。因为简单、高效的优势，TAIL-PCR及其修改的程序已经被广泛应用于各种生物学研究，包括大规模的分别测定拟南芥和水稻已知序列上游和下游T-DNA和转座子插入。
(以AD/HAS2扩增左边界),然后取首轮PCR产物为模板,以AD/HS2(AD/HAS3)进行二次 PCR,再以二次PCR产物为模板,AD/HS3(AD/HAS4)为模板进行第三轮PCR,将3轮的PCR产物进行电泳分析结果表明,采用TAIL- PCR的方法成功地从突变体中获得了带有T-DNA左右边界的旁侧序列,从而证明了TAIL-PCR法是有效地扩增基因旁侧序列...
3.鉴定T-DNA或转座子的插入位点,鉴定基因枪转基因法等转基因技术所导致的外源基因的插入位点等; 4.用于染色体测序工作中的空隙填补,获得完整的基因组序列; 5.用于人工染色体PAC、YAC和BAC的片段搭接。 ■ 实例 我们接受某省农科院的委托,应用Tail PCR技术对随机插入获得的镰刀菌突变体进行插入位点的定位,从而获得...
1、TAIL-PCR技术原理 TAIL-PCR是PCR的一种随机引物,随机引物PCR是将一种特异性引物结合在已知基因区域,随机引物结合在已知区域旁侧的某一区域,从而引发包括已知区域在内的片段的扩增(Ichikawa et al., 1997)[4]。 TAIL-PCR技术原理是:利用目标序列旁的已知序列设计的3个退火温度相对较高的嵌套特异性引物(special...