【解析】TAIL-PCR的基本原理:以基因组DNA为模板,利用依照目标序列旁的已知序列设计3个较高退火温度的嵌套特异性引物(specal prime,SP)和1个具有低T,值的短的随机简并引物(Aritary degenerateprime,AD)相组合,通过3轮具热不对称的温度循环的分级反应来进行PCR扩增,获得已知序列的侧翼序列。TAIL-PCR一般分为3次反应...
TAIL-PCR一般分为3次反应 第1次PCR反应由5次高特异性反应、1次低特异性反应、15次热不对称的大循环构成。通过5次高特异性的反应,使sp1与已知的序列退火并延伸,提高目标序列的浓度。1次低特异性的反应使简并引物结合到较多的目标序列上,随后进行15次TAIL循环。经过上述反应得到了不同浓度的3种类型的产物:特异性...
在TAIL-PCR反应中,其中后2种目标产物可以通过以嵌套的特异性引物进行的后续反应来消除。TAIL-PCR的基本原理是利用目标序列旁的已知序列设计3个嵌套的特异性引物(special primer,简称sp1,sp2,sp3,约20bp),用它们分别和1个具有低Tm值的短的随机简并引物(arbitrary degenerate prime,AD,约14bp)相组合,以基因组DNA为...
TAIL-PCR，即交错式热不对称PCR，也称为巢式PCR，是一种用于进行染色体步移的创新技术，被称为Genome Walking技术。这项技术的独特之处在于，它使用三个嵌套的特异性引物和简并引物进行连续的PCR循环。通过这种方式，可以利用不同的退火温度进行选择性扩增目标片段。所得到的片段可以直接用于探针标记和...
在TAIL-PCR反应中,其中后2种目标产物可以通过以嵌套的特异性引物进行的后续反应来消除。TAIL-PCR的基本原理是利用目标序列旁的已知序列设计3个嵌套的特异性引物(special primer,简称sp1,sp2,sp3,约20bp),用它们分别和1个具有低Tm值的短的随机简并引物(arbitrary degenerate prime,AD,约14bp)相组合,以基因组DNA为...
1、TAIL-PCR技术原理 TAIL-PCR是PCR的一种随机引物,随机引物PCR是将一种特异性引物结合在已知基因区域,随机引物结合在已知区域旁侧的某一区域,从而引发包括已知区域在内的片段的扩增(Ichikawa et al., 1997)[4]。 TAIL-PCR技术原理是:利用目标序列旁的已知序列设计的3个退火温度相对较高的嵌套特异性引物(special...
在TAIL-PCR 反应中,后两种非目标产物可以通过以嵌套的特异性引物进行的后续反应来消除。2.反应步骤 TAIL-PCR 一般分为3 次反应。第1 次PCR 反应由5 次高特异性反应、1 次低特异性反应、10 次较低特异性反应和12 次热不对称的超级循环构成。通过5 次高特异性的反应,使sp1 与已知的序列(载体或T2DNA 等) ...
•一.TAILPCR技术原理•二.TAILPCR实验操作流程•三.TAILPCR注意事项•四.TAILPCR应用 •一.原理：热不对称性PCR(thermal asymmetricinterlacedPCR,简称TAILPCR)，是利用目标序列旁的已知序列设计3个嵌套的特异性引物(specialprime,简称sp1,sp2,sp3),用它们分别和1个具有低Tm值的短的随机简并引物(Arbitrary...
Tail PCR，即热不对称交错PCR，是一种特殊的PCR技术，由Liu等人在1999年提出。它是在常规的热不对称PCR基础上发展起来的，其核心原理是通过使用一系列特定的巢式引物和一个相对较短的非特异性引物（通常称为arbitrary primer）来扩增已知序列的两侧（尾部）序列。在Tail PCR中，关键在于两类引物的设计和...