植物遗传学方面的另一个长期研究挑战是,通过随机插入来自根癌农杆菌( Agrobacterium tumefaciens ,一种植物病原体)的转移DNA(T-DNA)而创建出大量基因工程植物,并对其进行研究。目前已创建超过70万条T-DNA 拟南芥插入株系,可用于研究单个基因的功能。然而,传统研究方法无法完成这项挑战。T-DNA株系的选择原理很简单,...
点击SIGnAL T-DNA Verification Primer Design 将SALK号输入 设计好了,记录下LP与RP的序列及退火温度。 假如是自己设计,一般进行鉴定的引物距离T-DNA插入的位置300bp以上为宜。 自己设计的话需要在http://signal.salk.edu/cgi-bin/tdnaexpress查看插入方向 箭头方向为插入方向 查看插入位点 SALK没有的需要查询TAIR,...
转座酶(Transposase)是一种特殊的酶,它能够介导转座反应,即将一个DNA片段从一个位置剪切并插入到另一个DNA分子的特定位置。在脓杆菌转化法中,转座酶基因含在农杆菌的T-DNA(转位子DNA)区域中,起着将外源DNA导入真菌细胞并整合到真菌基因组中的作用。 转座酶基因的功能可以分为两个主要方面: (1)剪切:转座酶能够...
T-DNA插入鉴定实验报告.docx,1 1 / 1 文档可自由编辑 T-DNA 插入突变体的鉴定 时明辉 同组者: 薛敏 学号:202300220239 摘要 Ti 质粒是上有一段特别的 DNA 区段,当农杆菌侵染植物细胞时,该DNA 区段能自发转移进植物细胞,并插入植物染色体DNA 中。所以 Ti 质粒上的这一段
为了解基因组存在T-DNA插入时,即基因组构成为AC而样本基因组为ABC的情况得到的测序结果在序列比对的时候的可能情况,因此需要先要使用模拟数据进行探索。 第一步:构建参考序列和实际序列。这一部分会用到samtools,emboss和entrez-direct, 都可以通过conda安装 ...
为了解基因组存在T-DNA插入时,即基因组构成为AC而样本基因组为ABC的情况得到的测序结果在序列比对的时候的可能情况,因此需要先要使用模拟数据进行探索。 第一步:构建参考序列和实际序列。这一部分会用到samtools,emboss和entrez-direct, 都可以通过conda安装 ...
在实际操作中，首先需要构建含有目的基因的农杆菌转化载体，然后将该载体转入农杆菌中。接下来，通过农杆菌侵染植物叶片或茎段等部位，使农杆菌进入植物细胞。农杆菌侵染植物细胞后，T-DNA会被释放出来，进而插入到植物基因组中。最后，通过细胞和组织培养技术，可以再生出转基因植株。这种方法具有高效、稳定...
拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定 09生工吴超 200900140129 一、实验原理 T-DNA插入法是反向遗传学研究的重要手段。T-DNA是农杆菌的一个大质粒，长度在25kb左右。野生型农杆菌的T-DNA上带有激素合成基因，感染植物后会导致植物细胞快速增殖形成愈伤组织，失去分化能力。所以一般实验使用改造后的农杆菌——T-DNA中导入了卡...
T-DNA插入鉴定的原理 （以拟南芥为例）叶片研磨离心冰浴离心 DNA提取液 上层溶液 洗涤干燥 细胞裂解 异丙醇沉淀 DNA溶液 具体步骤 提取缓冲液：200mMTris-Hcl(PH7.4);25mMEDTA(PH8.0);250mMNacl;0.5%SDS(1)取拟南芥两片叶子，置于1.5ml离心管中，加入700ml提取缓冲液；（2）用研磨棒研磨植物材料，直至...