)中,荧光信号是由荧光探针或荧光DNA结合染料(如SYBR Green)产生,其强度与PCR产物分子(扩增子)的数量成正比。每个循环结束时,收集荧光信号强度,通过将荧光强度与循环数作图,qPCR仪生成扩增曲线,其表示在整个PCR过程中产物的累积,通过这个过程,即可实现量化。如果样品中特定的序列(DNA或RNA)丰富,则在较早的循环中观察...
1、荧光染料法（SYBR Green）：SYBR Green Ⅰ是荧光定量PCR中最常用的荧光染料，它能与所有的双链DNA...
1.操作简便：SYBR Green I荧光染料法实质上是在常规的PCR反应中添加了荧光染料，借助染料和双链DNA的结合所发出的荧光实时监控反应的进程。由于不需要设计序列特异性探针和优化反应条件，操作简便易行。2.成本低廉：与需要设计特异性探针的荧光定量检测法相比，SYBR Green I法的成本较低，适合大规模高通量的实验。3....
qPCR染料法的原理 qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟上,并发出较强的荧光信号。随着PCR循环数的增加,越来越多的染料与双链DNA结合,产生的荧光量与双链DNA含量成正比。因此可以通过检...
在qPCR技术中，TaqMan探针法和SYBR Green染色法是两种广泛应用的方法。TaqMan探针法通过特异性探针识别目标序列，具有较高的特异性和准确性。而SYBR Green染色法则通过荧光染料标记双链DNA，具有操作简便的优势。尽管SYBR Green染色法在操作上较为简单，但在特异性上不如TaqMan探针法。这是因为SYBR Green染色...
1、 DNA结合染料—SYBR Green I 法 • 原理:SYBR Green I 是一种DNA结合染料,其与双链DNA结合后,荧光大大增强,DNA与染料结合所释放的荧光量与dsDNA的数量成正比。因此,检测到的荧光信号可反映出PCR体系存在的双链DNA数量。 • 特征:可逆荧光,最大吸收波长497nm,最大发射波长520nm。
采用琼脂糖电泳检测双链DNA时,SYBR GreenⅠ是最灵敏的荧光染料,当其结合到核酸上时,会产生很强的荧光及高量子产额,DNA/SYBR GreenⅠ复合物的量子产额均为0.8。由于与核酸结合后能产生很强的信号,背景极低,并且对核酸的亲和力高,因此SYBR染料可在低浓度条件下使用。SYBR GreenⅠ的最低检出限:20pg DNA(254nm);...
SYBR Green I方法 SYBR Green I方法是目前最为常见的荧光染料,其作用原理为:SYBR Green I是一种只与双链DNA小沟结合的染料,并不与单链DNA链结合,而且在游离状态不发出荧光,只有掺入DNA双链中才可以发光,因此,在PCR体系中,随着特异性PCR产物的指数扩增,每个循环的延伸阶段,染料掺入双链DNA中,其荧光信号强度与...
总的说来,荧光检测技术可大致分为两大类:通用型的荧光染料检测法和高特异性的荧光探针法。前者主要是利用荧光染料(如SYBR Green I)与双链DNA分子结合发光的特性来指示扩增产物的增加,优点是:无需另外设计荧光探针,无需特别优化条件,简便易行,成本较低,能适用于任何一款定量PCR仪,缺点是专一性不如探针法;而后者...
SYBR Green染料法相对定量qPCR实验 实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 实验材料:动物组织或血液 试…