积小步而成千里，汇小流以成江海。—荀子《劝学篇》本周我们将深入探讨一个神奇的实验话题——SYBR Green I染料法。这种染料法在qPCR技术中发挥着关键作用，其独特的检测原理和显著特点，共同塑造了我们绚丽多彩的分子生物学世界。SYBR Green I染料能够选择性地结合于dsDNA双螺旋的小沟区域，并发出绿色荧光。在游离...
1.操作简便：SYBR Green I荧光染料法实质上是在常规的PCR反应中添加了荧光染料，借助染料和双链DNA的结合所发出的荧光实时监控反应的进程。由于不需要设计序列特异性探针和优化反应条件，操作简便易行。2.成本低廉：与需要设计特异性探针的荧光定量检测法相比，SYBR Green I法的成本较低，适合大规模高通量的实验。3....
qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟上,并发出较强的荧光信号。随着PCR循环数的增加,越来越多的染料与双链DNA结合,产生的荧光量与双链DNA含量成正比。因此可以通过检测qPCR体系中的荧光...
qPCR染料法的原理 qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟上,并发出较强的荧光信号。随着PCR循环数的增加,越来越多的染料与双链DNA结合,产生的荧光量与双链DNA含量成正比。因此可以通过检...
可以有效提高定量PCR的效率，当荧光染料 SYBR Green I 与 DNA 双螺旋结合时，在溶液中，未结合的染料显示出较小的荧光，而当它与DNA 结合后荧光就会急剧增强。由于 SYBR Green I 染料较为稳定（在 30 次扩增循环中仅损失 6% 的活性）并且 LightCycler 仪器的滤光片组与激发和发射波长相匹配，所以它常常被用于...
qPCR小课堂之SY..qPCR染料法的原理qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟
1、 DNA结合染料—SYBR Green I 法 • 原理:SYBR Green I 是一种DNA结合染料,其与双链DNA结合后,荧光大大增强,DNA与染料结合所释放的荧光量与dsDNA的数量成正比。因此,检测到的荧光信号可反映出PCR体系存在的双链DNA数量。 • 特征:可逆荧光,最大吸收波长497nm,最大发射波长520nm。
染料法一般使用的是SYBR Green I染料,这是一种可以与双链DNA小沟结合的荧光染料,其不会与单链DNA结合,且在游离状态下几乎无荧光,只有与双链DNA结合才会发出荧光,因此将PCR扩增产生的双链DNA数量与荧光强度直接关联,产生实时监测的效果。 SYBR Green染料法优点 ...
qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟上,并发出较强的荧光信号。随着PCR循环数的增加,越来越多的染料与双链DNA结合,产生的荧光量与双链DNA含量成正比。因此可以通过检测qPCR体系中的荧光...