通过定量PCR将细胞DNA数量与单拷贝基因BDNF进行归一化,发现C1、C2和C4株系中SV40Tag序列的数量相似,而C3株系中SV40Tag序列的数量仅为C1、C2和C4株系的一半。半定量RT-PCR显示SV40Tag mRNA的表达水平相似(图1a),Western印迹分析显示所有四个细胞克隆中都存在SV40Tag蛋白(90kDA)(图1b)。此外,免疫细胞化学染色法...
SV40 T抗原通过多种机制影响细胞周期,主要包括: 抑制细胞衰老:通过抑制p53和Rb等抑癌基因的功能,延长细胞的寿命。 促进细胞增殖:激活细胞周期相关的基因,推动细胞进入S期和M期。 抑制细胞凋亡:通过调节凋亡相关的信号通路,防止细胞自我毁灭。 3. SV40 T抗原与细胞永生化的关系。 SV40 T抗原作为DNA病毒的重要成分,通...
SV40病毒基因组早期基因编码两种肿瘤抗原(tumor antigen，T抗原)，洋其分子量分别为94000(大T抗原)和170...
猴空泡病毒40:SV40,是多瘤病毒科的一种小型环状病毒,其中猴空泡病毒40大T基因抗原可与多种蛋白结合以延长细胞周期以及促进与细胞永生相关基因的表达。 永生化:体外培养的细胞在一定的实验条件下从增殖衰老危机中逃离,从而具有无限增殖能力的过程,不影响其核型与分化能力,为细胞的临床应用提供基础。 背景:细胞永生化是...
第三军医大学硕士学位论文SV40T抗原基因诱导可逆性永生化黑素细胞的生物学特征评价摘要正常细胞在体外培养时生命期是有限的,细胞增殖一段时间后会出现群体生长缓慢,有丝分裂停滞,进而衰老死亡,这种现象叫做复制衰亡( repl i cati ve senescence)。细胞的这种生物学现象导致一些体外培养的细胞因生长增殖能力衰竭、数量不...
1.一种构建永生化细胞株的方法,其特征在于,包括以下步骤: 1)构建sv-40t抗原慢病毒表达载体: 以含sv40t抗原cdna序列的sv40tsa58质粒为模板,根据ncbi的sv40完整基因组(nc_001669.1)设计特定的质粒构建引物,高保真pcr获取sv40t抗原全长cdna,对扩增得到pcr产物进行纯化; 将pcr产物topo克隆进入pentrtmtopo载体,获得pentr...
目的建立猿肾病毒40大T抗原(SV40Tag)永生化尿源性干细胞,为组织工程学及再生医学提供稳定的细胞来源。 方法利用脂质体(Lipofectamine2000)介导将含SV40Tag基因质粒pMPH-FRT-SV40T及转座酶质粒(transposase)共转染至临床分离的尿源性干细胞中。潮霉素(Hygromycin)筛选后阳性细胞克隆并连续传代,观察细胞形态学以及增殖情况...
目的建立永生化大鼠前软骨干细胞(PSCs)株,为研究前软骨干细胞的分化机制及临床应用奠定基础.方法用L ipofectam ineTM2000介导基因转染,将含有SV40T抗原基因的真核表达载体pCMVSV40T/PUR导入经免疫磁珠分选出的原代PSCs进行稳定表达,用嘌呤霉素筛选出阳性克隆并扩大培养,观察细胞形态及生长状况,绘制细胞生长曲线,用免疫...
3.慢病毒介导sv40t抗原转染原代分离细胞,筛选获得永生化细胞株 采用肝星状细胞作为待永生化细胞。 (1)肝星状细胞原代分离和培养:获得人肝脏小块新鲜手术标本,采用用酶液灌注消化及密度梯度离心两步法分离肝星状细胞并进行原代培养扩增,采用α-sma(hsc的重要标志)(图4a)、desmin免疫荧光染色及油红o染脂滴(图4b),...
SV40T抗原基因永生化新生大鼠前软骨干细胞株的构建 维普资讯 http://www.cqvip.com