SpyCas9 核酸酶与 sgRNA形成复合物 切割位点位于 PAM 序列上游的三个核苷酸处(以红色显示)。PAM 位于与 sgRNA 序列互补的 DNA 的链上。 使用Spy Cas9 核酸酶 进行体外 DNA 切割 根据推荐条件建立反应体系,用 1% TBE 琼脂糖凝胶分离切割产物。起始 DNA 为 PvuII 线性化的 pBR322 质粒 DNA。
EnGen® Spy Cas9 切刻酶是 Cas9 核酸酶的突变体,其在 RuvC 核酸酶结构域中引入了点突变(D10A),因而可以产生切刻,但不能切割 DNA(1,2)。与 EnGen Cas9 NLS 切刻酶(NEB #M0646)一样,EnGen Spy Cas9 切刻酶靶向 DNA 切割过程需要与具有 3’ NGG PAM(Protospacer Adjacent Motif)的位点互补的引导 RNA...
SpyCas9Anti-CRISPR活性筛选基因编辑定向进化CRISPR-Cas是存在于细菌和古细菌中用来防御外源DNA入侵的获得性免疫系统.根据这一特点,科学家基于化脓链球菌(Streptococcus pyogenes)的Cas9(即SpyCas9)开发出了基因编辑系统.由于SpyCas9具有设计简单,操作简便,周期短,成本低等优势,短时间内迅速风靡全球生物,医学及其它相关实验...
SpyCas9 系统是当下最重要、也是最广泛使用的基因编辑工具,广为应用于细胞、组织或个体内 DNA 的敲除、激活、修饰等领域。但 SpyCas9 在细胞里的活性不受“制约”,反而可能产生破坏性。换言之,如何让 SpyCas9 在剔除指定的“坏基因”而不殃及其他基因,怎样能在某个时间点上敲除 DNA,而在其他时间段不发生作用,...
EnGen®Spy dCas9 核酸酶是 Cas9 核酸酶的无活性突变体,保留了与 DNA 的结合活性(1,2)。该核酸酶包含 D10A 和 H840A 这两个点突变,可分别导致 RuvC 与 HNH 核酸酶结构域失活。N 端 SNAP-tag®标签可与荧光基团、生物素和许多其它利于可视化和靶标富集的偶联物共价结合。与 Cas9 核酸酶一样,EnGen ...
1.SpyCas9的基因编辑活性抑制位点,所述活性抑制位点选自SpyCas9中的Glu1108、Ser1109、Ser1216、Lys1200、Arg1335、Arg976和Arg1333中的一个或多个。 2.权利要求1所述的基因编辑活性抑制位点在制备基因编辑相关制剂中的用途。 3.根据权利要求2所述的用途,其特征在于,所述基因编辑相关制剂为SpyCas9的基因编辑/核酸...
为了研究AcrIIA2直接抑制SpyCas9活性的分子机制，研究人员利用X-ray晶体学的方法成功解析了AcrIIA2-SpyCas9-sgRNA的三元复合物晶体结构（3.3 埃）。结构发现AcrIIA2是由三个α螺旋及一个β折叠组成的紧凑结构，它结合在SpyCas9的一个带正电荷的凹槽区域。该区域由PI、HNH、WED和REC2结构域形成。PI结构域上R1333...
DD-dSpyCas9-mCherry-APEX2(Plasmid #108570) 上海海吉浩格生物科技有限公司 http://hedgehogbio.com测序及更多信息: 点击联系我们QQ:1822235623 微信:1822235623,17031145927 HH-CAS-200 Lenti-iCas9-EGFP-rtTA-Advanced(pinducer20-iCas9+EGFP) HH-CAS-199 Lenti-iCas9-MCS-HA-rtTA-Advanced (pinducer20-i...
EnGen Spy Cas9 NLS, is an RNA-guided endonuclease that catalyzes site- specific cleavage of double stranded DNA. The location of the break is within the target sequence 3 bases from the NGG PAM (Protospacer Adjacent Motif) (1). The PAM sequence, NGG, must follow the targeted region on the...
Aldevron的SpyFi™ Cas9核酸酶有助于减少脱靶编辑事件的发生。 研究背景 T淋巴细胞的过继性细胞疗法正被逐渐用于癌症治疗领域。转基因T细胞受体(TCR)设计的T淋巴细胞对肿瘤抗原具有特异性,目前已有大量癌症临床前及临床开发的研究。内源性TCR基因的敲除可以改善TCR转基因的表达,PD-1的敲除可以减少肿瘤表达的PD配体诱导...