SMARTer II A引物引导MMLV逆转录酶参与以刚合成的cDNA链为模版的第二条链的合成。 得到双链cDNA,两端接好人工设计的PCR引物序列 然后加入“常规PCR引物”,进行常规扩增 再 超声打断,建库,测序 此法亮点总结 使用定位引物,保证互补链的合成是从mRNA的3'最末端配对处开始;同时保证合成的链的下游连接上通用PCR序列; ...
PCR是在最后阶段使用的,主要是为了连接正确的测序接头,CEL-seq开发者纽约大学的Itai Yanai介绍到。 CEL-seq所需试剂都是现成的,大约两天时间生成测序文库和测序数据,Yanai指出。需要注意的是,CEL-seq与大多数方案一样,测序转录本的3’端。Enard等人并没有亲自尝试着一技术,只是在比较研究中用到了CEL-seq数据。从...
6种测序方法都是通过捕获mRNA的3`段polyA进行反转录、扩增、建库和测序。 单独介绍单细胞测序方法 NGS原理- 单细胞转录组测序-介绍CEL-seq2, Drop-seq, SCRBseq, Smart-seq 主要的区别在于Smart-seq/C1和Smart-seq2为基于full length的测序方案,而其余的四种为基于unique molecular identifiers (UMIs)的测序方案;...