目前,siRNA的定量分析可大致分为两类,基于杂交技术(液相荧光(LC-FLD)、定量聚合酶链反应(qPCR)和杂交酶联免疫(Hybird-ELISA)等)的分析和基于色谱技术(HPLC、LC-MS/MS等)的分析。siRNA的定量分析中LC-MS/ MS技术的特异性最佳[2],具有选择性好、可多通道同时检测正/反义链及代谢产物、前处理简单等优势。 本文...
通常在非临床早期体内研究中,缺少siRNA相关的代谢研究,因此为避免代谢产物对siRNA药物浓度检测的干扰,血浆中siRNA的浓度可采用液相色谱-三重四极杆质谱联用(LC-MS/MS)进行定量检测(见文章:液相色谱-质谱联用在寡核苷酸药代动力学定量分析中的应用)。在变性条件下,双链结构的siRNA经过变性可产生正义和反义链两个单链...
常规化学合成siRNA多为19nt RNA + dTdT (3’悬垂)的RNA双链分子,未经任何化学修饰。 Sense:正义链,RNA,序列与靶序列相同; Antisense:反义链,RNA,序列与靶序列互补; dTdT:两端悬垂,DNA,均在3’端。 还支持各种特殊修饰或突变设计 图1 常规siRNA结构示意图 图2 化学合成siRNA单链LC-MS质控结果...
基于LC-MS检测siRNA有诸多难点,比如化合物极性大,色谱保留弱,此外siRNA药物为双链结构,需要进行双链解链,检测单链浓度,因此需要将正义链和反义链在色谱保留上尽量分离,降低双链相互干扰的影响;由于药物容易被限制性核酸内切酶降解,因此需要重点关注稳定性问题。 在质谱检测方面,由于其检测局限性,对于分子量较大的siRN...
通常在非临床早期体内研究中,缺少siRNA相关的代谢研究,因此为避免代谢产物对siRNA药物浓度检测的干扰,血浆中siRNA的浓度可采用液相色谱-三重四极杆质谱联用(LC-MS/MS)进行定量检测(见文章:液相色谱-质谱联用在寡核苷酸药代动力学定量分析中的应用)。在变性条件下,双链结构的siRNA经过变性可产生正义和反义链两个单...
siRNA在肝脏、肾脏等关键组织的分布，通过LC-MS/MS和荧光成像技术，兼顾定量和组织结构信息。RISC-siRNA复合体浓度的定量，利用RNA免疫沉淀和茎环法RT-qPCR，实现高灵敏度检测。靶基因mRNA降解效率的评估，通过RT-qPCR，结合SYBR Green或Taqman探针法，确保特异性。靶蛋白抑制效率的测定，通过ELISA、Western ...
图2 化学合成siRNA单链LC-MS质控结果 关键字:siRNA;RNA;DNA; 公司简介 广州市锐博生物科技有限公司(简称锐博生物)成立于2004年,是一家由诺贝尔奖获得者和国家重大人才工程入选者领衔的、以核酸技术为核心的国家火炬计划重点高新技术企业。基于世界领先的寡核苷酸和mRNA技术,锐博生物致力于提供高品质的各类寡核苷酸和mRN...
鼎泰集团拥有 6 大分析平台(免疫分析平台、细胞分析技术平台、qPCR平台、LC-MS/MS及LC-HRM分析平台、超灵敏分析平台、多因子检测平台),能够满足 siRNA 双链或 AS 高灵敏度生物分析、免疫激活相关指标监测的需求。此外,我们已建立了丰富的生物样本库,为 ONTs 生殖发育毒性试验中可能涉及的生物分析(包括暴露量评估、...
采用经验证的 LC-MS/MS 方法检测了血浆中 Givosiran(详细的方法学内容详见后文)。0.035 和 0.1 mg/kg 剂量组血浆中 Givosiran 浓度均低于定量下限;0.35~5.0 mg/kg剂量范围内,Givosiran 呈线性药代动力学特征,Tmax为0.5~5 h,24 h 内血浆浓度迅速下降,t1/2为4~10 h。
美迪西案例:siRNA plasma quantification (LC-MS/MS) 核酸药物药效学评价 寡核苷酸药物开发过程中药效学方面的挑战包括:靶向不足导致靶部位的寡核苷酸药物浓度低导致给药剂量不断增高;寡核苷酸药物与非靶 RNA 结合引发的脱靶毒性等。 美迪西案例:核酸药物药效学评价 ...