1. 接种细胞 贴壁细胞：转染前24h，接种1~5×10^5个细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中，使转染时的细胞汇合度能够达到30~50%。（注：铺板时要将细胞消化完全混匀，避免细胞堆积生长。）悬浮细胞：转染前24h，接种1~5×10^5个细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中，使转染时细胞数量应在4~8×1...
一般来说,抗生素在细胞内的积累是有毒性的,因此在siRNA转染前后(72h内:24h用于传代细胞生长,48h用于转染后的生长)的实验过程中应该尽量避免使用抗生素,同时血清尽量在转染的时候使用,因为血清中富含各类蛋白,带有大量负电荷,会和阳离子脂质体结合,和核酸相竞争,导致转染效率不高。 # 合适的对照组 对照的分为阴性和...
QPCR检测:优先推荐QPCR检测RNA水平的沉默效果,推荐在24h到48h检测,可适当调整。QPCR检测沉默效果时,在设计引物时最好是将引物设计在沉默位点(靶序列)的两侧,而不是在同侧。因为RNAi引起的沉默是先进行mRNA的切割之后造成mRNA的降解。另外,即使设计在两侧,也不要离沉默位点(靶序列)太远的地方,不然可能会造成对沉默...
1. 接种细胞 贴壁细胞:转染前24h,接种1~5×10^5个细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中,使转染时的细胞汇合度能够达到30~50%。(注:铺板时要将细胞消化完全混匀,避免细胞堆积生长。) 悬浮细胞:转染前24h,接种1~5×10^5个细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中,使转染时细胞数量应在4~8×105/孔。
尽量使用无抗生素的培养基：细胞在有抗生素的条件下会变的非常敏感，如必须使用抗生素，建议6h后更换带抗生素的培养基3.减少siRNA用量：建议在5-100nM终浓度范围内，找到发挥最优基因沉默效果的最少siRNA用量4.减少转染试剂用量：按比例调整或更换转染试剂类型5.选取更早的时间点进行基因沉默分析：如选用转染后24h检测...
1.转染后24h内最好不要挪动细胞,也不要拿出在显微镜下观察,期间也无需进行细胞换液。其表型可能在48-72h后逐渐显现,根据实际情况进行细胞换液或收细胞进行后续验证。 2.此种转染方式最长可维持5-7天的基因敲除效果。 3. Lipofectamine™ RNAiMAX试剂在冰箱4℃保存,切记不可冷冻。
基因沉默效率的检测时间非常重要。研究者最好在siRNA转染后24h~48h之间进行检测,由于细胞会分裂增殖,对于mRNA敲降水平的检测结果有影响,因而检测时间最晚不建议超过72小时。 3)设置内参 RT-qPCR检测中,合理设置内参十分关键。内参能够有助于使检测的样本量中各种影响因素趋于均质化,而不会导致实验结果出现过大的偏差...
基因沉默效率的检测时间非常重要。研究者最好在siRNA转染后24h~48h之间进行检测,由于细胞会分裂增殖,对于mRNA敲降水平的检测结果有影响,因而检测时间最晚不建议超过72小时。 3)设置内参 RT-qPCR检测中,合理设置内参十分关键。内参能够有助于使检测的样本量中各种影响因素趋于均质化,而不会导致实验结果出现过大的偏差...
1.转染后24h内最好不要挪动细胞,也不要拿出在显微镜下观察,期间也无需进行细胞换液。其表型可能在48-72h后逐渐显现,根据实际情况进行细胞换液或收细胞进行后续验证。 2.此种转染方式最长可维持5-7天的基因敲除效果。 3. Lipofectamine™ RNAiMAX试剂在冰箱4℃保存,切记不可冷冻。
基因沉默效率的检测时间非常重要。研究者最好在siRNA转染后24h~48h之间进行检测,由于细胞会分裂增殖,对于mRNA敲降水平的检测结果有影响,因而检测时间最晚不建议超过72小时。 3)设置内参 RT-qPCR检测中,合理设置内参十分关键。内参能够有助于使检测的样本量中各种影响因素趋于均质化,而不会导致实验结果出现过大的偏差...