1. 接种细胞 贴壁细胞：转染前24h，接种1~5×10^5个细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中，使转染时的细胞汇合度能够达到30~50%。（注：铺板时要将细胞消化完全混匀，避免细胞堆积生长。）悬浮细胞：转染前24h，接种1~5×10^5个细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中，使转染时细胞数量应在4~8×1...
125ul。siRNA是一种小RNA分子，一般由Dicer核酸酶加工而成。1odsirna需要加125ul的depc水，溶解之后正好是20um的浓度。
siRNA浓度和用量的一般换算:1OD≈33ug≈2.5nmol 1OD加125ul的水,得到20uM的浓度。1ul就是20pmol,在1ml细胞培养液中加1ul(20pmol),那终浓度就是20pmol/ml=20nM。加2ul就是40nM,以此类推。如果按ug计算,1OD加125ug水溶解后,质量浓度为33ug/125ul=0.264ug/ul。 siRNA影响基因阻断水平 (Gene Knockdown L...
(B) 用50μL Opti-MEM稀释1.0μLLipofectamine™2000(使用前轻轻摇匀),轻轻吹吸3-5次混匀,室温下静置5min,此为V3。 (C) 混合转染试剂V3和siRNA稀释液V2,轻轻吹吸3~5次混匀,室温下静置20min。 (D) 转染复合物(V2+V3)加入到含有细胞及培养液(V1,约400μL)的24孔细胞板中,100 μL/孔,前后轻揺...
利用RNase-free ddH2O溶解siRNA干粉,终浓度为20 μM,即利用125 μL的RNase-free ddH2O溶解1 OD(33 μg或2.5 nM)siRNA干粉,震荡(Vortex)使其溶解。 4. 转染复合体制备。准备2个无菌EP管,各加入100 μL OPTI-MEM 培养液 (Gibco),其中一管加入4 μL Omifection-R,混合10次,室温静置5 min。另外一管...
1、稀释质粒(siRNA)(可在第一天做) (1)从100μM(保存浓度,-20℃)稀释到10μM(工作浓度)=10pmol/μl (2)或1OD粉末溶解于125μlDEPC水中 2、配管(小EP管,小枪头) A+B混合室温静置20min 3、细胞用PBS洗1遍,之后加入0.8ml 完全培养基 4、将2加入3,放入培养箱培养24h更换完全培养基 ...
注: 1OD=2.5nmol=40 μg,此配置为参考,实际请按COA文件 | 对照组的设立 表2, 对照组说明 正式实验为实验组、NC组(*必做)和FAM-NC组(*必做),实验组的抑制效果均需与NC 组比较。 在预实验中设置Blank组和Mock组,以确认转染试剂及阴性对照无毒副作用,且对基因沉默检测指标无显著干扰影响。
对于21个碱基左右的双链siRNA/miRNA,1OD大约是2.5nmol,加125μl的DEPC水,得到20μM的浓度;对于21个碱基左右的单链RNA(inhibitor),1OD的大约是5nmol,需加250μl的DEPC水,得到20μM的浓度(如果是0.5 OD或者2OD分装,加入水量就减半或者加倍)。可以枪头反复吹打溶解混匀,也可以低速涡旋震荡溶解。
1 FAM-siRNA的溶解及保存 1.1 由于OligoRNA很轻的干膜状附在管壁上,打开时极易散失,所以打开离心管前先离心,然后再慢慢打开管盖,溶解时加适量DEPC水后盖上管盖,振荡溶解。 1.2 需要浓度20uM的样品,如何计算重悬siRNA缓冲液的量?你购买了1OD的siRNA,想溶解为20uM 的样品,应该使用125ul附送的DEPC水去重悬1OD...
1对(1×1 OD) 阳性对照siRNA oligos 1对(1×1 OD) 如何订购RNA合成相关服务? 请将您的需求发送至order@genecfps.com。 您也可以致电 0510-85220969联系我们。 赛索飞发文章有奖征集活动 发表文章/论文请注明产品/服务购买自江苏赛索飞生物科技有限公司。中文:赛索飞生物;英文:GENCEFE Biotech (Wuxi, China)...