高通量sgRNA文库筛选是用全基因组或特定通路的sgRNA文库在指定细胞内通过功能性筛选、富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析，挖掘与表型相关的基因或在全基因组范围内筛选药物新靶点。CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选大体流程分为五步，即gRNA文库选择，gRNA文库扩增，gRNA文库慢病毒包装，gRNA文库筛选，PCR扩增和NGS测序。常用的...
sgRNA文库构建主要是通过靶向同一基因设计并合成多条sgRNA，用CRISPR系统建立基因敲除库，经功能性筛选和测序分析，筛选出相关基因。1、设计合成sgRNA 设计gRNA，每个基因设计3-6条。通过芯片合成的方法合成sgRNA；2、文库构建 PCR扩增后，构建质粒，转化提取质粒，经NGS测序对丰度和平衡性进行分析，成功构建sgRNA文库；3...
由于活性和特异性可能无法预测,因此可能需要为每个感兴趣的基因设计多个sgRNA。 高通量sgRNA文库筛选 高通量sgRNA文库筛选是用全基因组或特定通路的sgRNA文库在指定细胞内通过功能性筛选、富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析,挖掘与表型相关的基因或在全基因组范围内筛选药物新靶点。CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选大体流程分为...
为加快构建进度,保证编辑正确率和靶点命中率,擎科生物推出人全基因组、特定信号通路或客户指定基因的sgRNA文库构建及筛选的一站式解决方案,包括sgRNA文库设计、sgRNA合成、慢病毒包装、细胞株构建、CRISPR Screen(sgRNA文库)测序分析等服务,为sgRNA文库构建保驾护航。 1、sgRNA文库构建 (1)产品详情 (2)交付标准 1)...
由于活性和特异性可能无法预测,因此可能需要为每个感兴趣的基因设计多个sgRNA。 高通量sgRNA文库筛选 高通量sgRNA文库筛选是用全基因组或特定通路的sgRNA文库在指定细胞内通过功能性筛选、富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析,挖掘与表型相关的基因或在全基因组范围内筛选药物新靶点。CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选大体流程分为...
sgrna 的合成主要分为两个阶段:产生前体和前体加工。首先,在细胞核内,sgrna 的前体被合成。sgrna 前体通常是由聚合酶Ⅱ(Pol II)转录而来,生成的初始产物称为原始 sgrna(precursor sgrna,psgrna)。随后,psgrna 会经过一系列的加工过程,如剪切、修饰等,最终生成成熟的 sgrna。这个过程主要发生在细胞核外的细胞质中...
sgRNA的工作原理如下: 1.选择特定目标序列:sgRNA首先需要选择一个特定的目标DNA序列进行识别和修饰。这个目标序列通常是由20个核苷酸组成,并与待编辑的基因序列匹配。 2.结合Cas9酶:sgRNA与Cas9酶形成复合物,通过与Cas9酶中的蛋白质结构相互作用,稳定了sgRNA-Cas9复合物的结构。 3.定位到目标DNA上:sgRNA的序列与目标...
CRISPR/Cas9 sgRNA文库简介 基因敲除实验成功的关键是筛选到高效的sgRNA,为了提高切割效率,在基因敲除实验中,通常,靶向同一基因设计并合成多条sgRNA。利用CRISPR/Cas9技术建立目标物种的全基因组敲除库或与特定功能相关的基因敲除库,通过功能性筛选和富集及后续PCR扩增和深度测序分析,发掘与筛选表型相关的基因,称为sgRNA文...
CRISPR文库筛选流程 CRISPR文库筛选的一般流程可分为4个主要阶段: 阶段1:文库构建:涉及文库中所有基因的sgRNA设计, sgRNA模板合成, sgRNA连接到特定的质粒模板构建文库质粒以及对构建成功的文库质粒进行质检。 阶段2:文库转导:大部分文库筛选实验都是通过慢病毒感染方法进行文库转导,所以该阶段涉及到文库慢病毒包装,包装好...
一、sgRNA文库介绍 sgRNA文库是指由大量单导RNA(single-guide RNA, sgRNA)序列组成的集合,这些sgRNA序列靶向特定基因组区域并用于CRISPR-Cas9系统中的基因编辑实验。 1、高通量筛选:sgRNA文库通常包含成千上万个sgRNA序列,能够同时靶向多个基因,通过高通量筛选找到影响特定表型的关键基因。在设计文库时,通常针对每个基因...