高通量sgRNA文库筛选是用全基因组或特定通路的sgRNA文库在指定细胞内通过功能性筛选、富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析，挖掘与表型相关的基因或在全基因组范围内筛选药物新靶点。CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选大体流程分为五步，即gRNA文库选择，gRNA文库扩增，gRNA文库慢病毒包装，gRNA文库筛选，PCR扩增和NGS测序。常用的...
一、sgRNA文库介绍 sgRNA文库是指由大量单导RNA(single-guide RNA, sgRNA)序列组成的集合,这些sgRNA序列靶向特定基因组区域并用于CRISPR-Cas9系统中的基因编辑实验。 1、高通量筛选:sgRNA文库通常包含成千上万个sgRNA序列,能够同时靶向多个基因,通过高通量筛选找到影响特定表型的关键基因。在设计文库时,通常针对每个基因...
高通量sgRNA文库筛选是用全基因组或特定通路的sgRNA文库在指定细胞内通过功能性筛选、富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析,挖掘与表型相关的基因或在全基因组范围内筛选药物新靶点。CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选大体流程分为五步,即gRNA文库选择,gRNA文库扩增,gRNA文库慢病毒包装,gRNA文库筛选,PCR扩增和NGS测序。常用的筛选...
首先,根据已知的 sgRNA 靶向规则(如保守外显子 5' 用于基因敲除,转录起始位点的上游或下游分别用于转录激活或抑制),确定感兴趣的靶向 sgRNA 文库的基因组区域。 其次,根据以下四个标准识别和选择 Cas9 同源特异性前间区序列邻近基序 (PAM) 的所有可能的sgRNA靶标,要求:...
由于活性和特异性可能无法预测,因此可能需要为每个感兴趣的基因设计多个sgRNA。 高通量sgRNA文库筛选 高通量sgRNA文库筛选是用全基因组或特定通路的sgRNA文库在指定细胞内通过功能性筛选、富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析,挖掘与表型相关的基因或在全基因组范围内筛选药物新靶点。CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选大体流程分为...
sgRNA文库是指一组包含数百万个sgRNA序列的基因集合。利用其可高通量敲除人类全基因、通路基因和特定的基因家族，并可快速筛选出和某些疾病表型及性状相关的基因，对基因功能研究、疾病诊断、分子治疗及药物研发等发挥重要作用。由于sgRNA文库可以全基因组筛选，不受序列、细胞或物种的限制，且可快速精准找到目的表型相关...
高通量sgRNA文库筛选是用全基因组或特定通路的sgRNA文库在指定细胞内通过功能性筛选、富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析,挖掘与表型相关的基因或在全基因组范围内筛选药物新靶点。CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选大体流程分为五步,即gRNA文库选择,gRNA文库扩增,gRNA文库慢病毒包装,gRNA文库筛选,PCR扩增和NGS测序。常用的筛选...
sgRNA文库筛选是针对CRISPR-Cas系统基因编辑应用中的sgRNA(single-guide RNA)文库,通过比对目标基因序列和sgRNA序列相似性,筛选出最优的sgRNA序列,用于指导Cas蛋白对目标基因进行精准的剪切。 具体原理如下: 1.设计引物:首先根据目标基因序列设计引物,引物长度一般设置为20bp-23bp。引物要覆盖目标基因全部外显子区域,以...
sgRNA的合成是CRISPR-Cas9技术的关键步骤之一,合成质量和效率直接影响到后续基因编辑的成功率。本文将深入探讨sgRNA合成的原理及相关技术。 二、sgRNA合成原理 sgRNA的合成通常由两个关键步骤组成:转录和修饰。转录是将sgRNA序列通过体外转录反应合成RNA分子,而修饰则是对转录得到的RNA进行化学修饰,以提高其稳定性和特异性...
CRISPR/Cas9 sgRNA文库简介 基因敲除实验成功的关键是筛选到高效的sgRNA,为了提高切割效率,在基因敲除实验中,通常,靶向同一基因设计并合成多条sgRNA。利用CRISPR/Cas9技术建立目标物种的全基因组敲除库或与特定功能相关的基因敲除库,通过功能性筛选和富集及后续PCR扩增和深度测序分析,发掘与筛选表型相关的基因,称为sgRNA文...