近年来有研究利用tRNA-sgRNA融合体并基于CRISPR-Cas9技术成功实现了对解脂耶氏酵母某些基因组位点的编辑。 tRNA-sgRNA融合体具有两大方面的优势:一方面tRNA可以促进sgRNA的表达;另一方面使用tRNA作为启动子驱动sgRNA的表达,消除了在crRNA的5‘端添加G或GG核苷酸的需要。 然而,tRNA-sgRNA融合体系统受到编辑成功率及效率低...
RNA聚合酶III的终止信号：在真核生物中，RNA聚合酶III（RNA Pol III）负责转录某些非编码RNA，包括tRNA...
Transfer RNA (tRNA) can link multiple sgRNAs (single-guide RNAs) to form a polycistronic gene, which then combines with a CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPRassociated gene 9) expression vector to form a polycistronic tRNA-sgRNA/Cas9 (PTG/Cas9) ...
摘要：tRNA可以将多个sgRNAs连接起来合并成一个多顺反子基因，再与CRISPR/Cas9表达载体结合形成多顺反 子tRNA-sgRNA/Cas9（PTG/Cas9）系统来对多靶点进行基因编辑。该系统已经在水稻中验证其可促进sgRNAs 的转录和提高多靶点的编辑效率。因此，为了在多年生黑麦草中实现高效的基因编辑，本研究中，构建了2个带有 tRNA...
在此基础上,研究人员采用拟南芥UBIQ10组成型强启动子启动Cas9和sgRNA模块以单一转录单元进行协同高效表达,并利用基于tRNA的多sgRNA串联,在紫花苜蓿中实现了同一基因或不同基因多个靶位点的高效编辑(图2)。该载体系统简捷、高效,在包括苜蓿(紫花苜蓿、蒺藜苜蓿、杂花苜蓿等)、杨树、烟草等重要作物的基因编辑中具有通用性...
该研究首先建立了基于tRNA-sgRNA系统的多重靶点胞嘧啶碱基编辑器SaKKHn-pBE,结果表明其能够编辑含有NNARRT, NNCRRT, NNGRGT和 NNTRGT PAM的靶点。该研究又进一步通过综合分析27个有效编辑靶点的碱基突变情况,明确了SaKKHn-pBE的主要技术参数,例如,其碱基编辑窗口为靶点1-15bp,主要集中在4-9bp;SaKKHn-pBE编辑窗口...
sgrna需要考虑碱基配对。RNA复制中A-U，U-A，C-G，G-C；（模板是RNA，产物也是RNA）。DNA复制中A-T，T-A，C-G，G-C；（模板是DNA，产物也是DNA）。转录中A-U，T-A，C-G，G-C；（模板是DNA，产物是RNA）。翻译中A-U，U-A，C-G，G-C；（模板是RNA，产物是多肽，但是利用工具tRNA...
上述成套试剂中,所述sgRNA可为tRNA-sgRNA; 所述tRNA-sgRNA如式I所示:tRNA-所述靶点序列转录的RNA-改造的sgRNA骨架(式I); 所述tRNA为1)或2)或3): 1)将序列1第474-550位中的T替换为U得到的RNA分子; 2)将1)所示的RNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的RNA分子; 3)与1...
RNA-TAG 利用细菌 tRNA 鸟嘌呤转糖基酶 (TGT) 将特定的含有17 个核苷酸 RNA 茎环结构内的鸟嘌呤(G)与天然底物前喹啉 (preQ1) 的修饰类似物交换。利用TGT的这一特性,理论上合成一个小分子,两端连接preQ1,并在RNA中引入两个...
为了促进使用这些骨架变体和来自不同物种的 tRNA 进行多重基因编辑的应用,创建了一个网页工具(SupClusterWriter)来生成引物集并提供模板序列,以便根据用户提供的目标序列和物种合成大型 sgRNA 表达单元。 作者首先通过结构导向的点突变和随机突变文库筛选,获得了15个与野生型骨架序列不同但保持编辑功能的gRNA骨架变体,...