系统关闭:关闭HPLC系统,妥善保存色谱数据。 五、HPLC纯度检测样本处理过程(SEC-HPLC) 1.系统平衡:使用与样品稀释相同的缓冲液,平衡SEC-HPLC系统,直到基线稳定。 2.加载样品:通过自动进样器或手动方式,将准备好的样品加载到色谱系统中。 3.洗脱和检测:以恒定的流速通过色谱柱,蛋白质将根据其大小依次洗脱,并通过检测...
SEC-HPLC的色谱柱通常采用颗粒尺寸均一、孔径分布狭窄的凝胶作为固定相。常用的凝胶材料包括琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺等。这些凝胶孔径大小在分子筛分布图上呈现出高斯分布。通过控制凝胶的孔径,可以实现对样品分子大小的有效分离。 在SEC-HPLC中,流动相通常是无机缓冲液,如磷酸盐缓冲液或甲醇/水溶液。流动相的选择...
SEC-HPLC是一种基于蛋白质分子大小的分离技术。它利用一个多孔的凝胶柱,较大的蛋白质分子无法进入凝胶内部,因此会在柱上流动速度较快,而较小的杂质分子则能进入凝胶内部,流动速度较慢。通过监测流出柱的吸光度信号,可以得到蛋白质样品的分子大小分布情况,从而评估样品的纯度。 2、准备工作 首先,需要准备好SEC-HPLC...
SEC-HPLC进行蛋白纯度分析时出现蛋白粘柱子是因为蛋白与柱填料发生了可逆或不可逆的相互作用，导致峰展宽...
Acclaim SEC-1000 HPLC 色谱柱 ✓ 用于高分辨率分离 mAb,包括单体、聚合体以及蛋白质水解产生的 Fab & Fc 片段 ✓ 用于分离质量为 100 ~ 50,000 Dalton 的 PEG 化分析物等其他化合物中的 mAb 偶联物 ✓用于分离质量为 1,000 ~ 1,000,000 Dalton 的 PEG 化分...
SEC-HPLC主要用于分离溶液中的大分子,如蛋白质、多肽、聚合物等,其原理是根据分子的尺寸在柱中进行排阻分离。 排阻极限与SEC柱的孔径大小有关。通常,SEC柱的孔径越小,其排阻极限也就越小。排阻极限是通过校准柱进行评估的,该柱上有一系列已知分子尺寸的标准物质,通过测定它们的保留时间来确定排阻极限。 在SEC-...
采用体积排阻色谱(SEC-HPLC)和激光光散射(LLS)研究了不同浓度和离子强度下大豆蛋白热诱导聚集体的分子量分布和粒径分布.在离子 …d.wanfangdata.com.cn|基于50个网页 2. 高效液相色谱 纯度:由以下方法测定纯度大于95.0%:(a)高效液相色谱(SEC-HPLC);(b)还原和非还原SDS-PAGE,银染。等电点:IEF分 …www.360bi...
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HPLC-SEC分析是确定治疗性蛋白质纯度的重要工具,并且在全世界范围内用作测量聚合物含量和污染物百分比(单克隆抗体制造过程)的标准方法。 鉴于蛋白质的完整性——在这种情况下,单克隆抗体由于温度变化、机械应力影响、pH波动和生产过程中以及整个生命周期中的紫外线照射的影响而受到威胁(另见[3]),因此,建立确定单克隆...
通过优化SEC-HPLC方法，我们可以提高蛋白质纯度的测定精度和灵敏度，为蛋白质研究和生物药物开发提供有力支持。1.高效SEC-HPLC的原理 高效SEC-HPLC利用分子筛柱对蛋白质进行分子大小的分离，从而实现对蛋白质纯度的检测。较大分子量的蛋白质会较快地通过柱床，而较小分子量的杂质则会滞留更长时间。通过检测样品中...