一般在20-50min。根据需要设置洗脱梯度,常为0-100%的缓冲液梯度。
方法优化:根据分析结果,可以对样品制备或SEC-HPLC条件进行优化,以改善分离效果和纯度检测的准确性。 通过上述详细的数据分析步骤,SEC-HPLC技术能够为研究者提供蛋白质样品的纯度、分子量和聚合状态等关键信息,有助于蛋白质的质量控制和生物药物的开发。
将样品注入SEC-HPLC系统中,一般使用自动进样器进行注射。注射量要根据柱的尺寸和样品浓度来确定,通常在10-100 μL之间。 5.流动相条件: 设置合适的流动相条件,包括流速、缓冲盐浓度、pH值等。这些条件需要根据样品的特性和柱的要求来确定。一般来说,流速在0.5-1 mL/min之间,缓冲盐浓度在10-100 mM之间,pH值在...
高效SEC-HPLC是一种可靠、准确的蛋白质纯度检测方法,对于生物药物研发和质量控制具有重要意义。通过优化和改进SEC-HPLC方法,我们可以提高蛋白质纯度分析的准确性和灵敏度,为蛋白质研究和生物药物开发提供可靠的数据支持。在进行高效SEC-HPLC分析时,科研人员应综合考虑样品特性和实验要求,并遵循最佳实践指南以确保结果的...
总结起来就是,在大小异质性的聚体分析上常规 SEC-HPLC分析比 CE-SDS分析更加客观;在大小异质性的片段分析上CE-SDS分析比常规SEC-HPLC更准确。 参考文献 1.人源化抗VEGF单克隆抗体制品的大小异质性分析
- HPLC纯度(分子筛)- SEC-MALS分子量SEC-MALS原理 SEC:尺寸排阻色谱法;有时称为GPC/GFC,即凝胶渗透色谱法或凝胶过滤色谱法。 GPC/SEC是根据不同的分子具有不同的流体体积而进行分离,而不是根据分子的分子量大小。色谱柱中填充了表面具有很多小孔的填料颗粒。当样品分子随流动相一起流经填料时,尺寸较小的分子...
分子筛HPLC,又称为体积排阻色谱(size exclusion chromatograghy, SEC),小分子量的化合物进入凝胶孔中,滞留时间长;大分子量的化合物不能进入孔中,会更早的被洗脱下来。分子筛色谱的优势在于能够处理至少1nmol的目的蛋白,并得到很好的分离效果,分离时间也很短,一般在3个小时以内,同时获得的层析分离峰也更小。
SEC-HPLCSEC-HPLC2010版中国药典版中国药典对仪器的一般要求和色谱条件对仪器的一般要求和色谱条件色谱柱:多使用凝胶或亲水刚性、多孔微球、机械强度好的聚合物等填充物使用水或缓冲盐作为流动相,流动相的pH值一般控制在28之间。流速一般在0.51.0ml/min检测器:常用UV(紫外-可见)检测器,检测波长通常为280nm。Page :...
结论:建立的SEC-HPLC法各项指标符合要求,可用于rHuPH20的纯度检测。[关键词] 重组人透明质酸酶;分子排阻色谱法;纯度[中图分类号] Q503 [文献标识码] A [文章编号] 1009-0002(2016)03-0432-04Development and Validation of SEC-HPLC Method for the PurityDetermination of Recombinant Human HyaluronidaseLYU ...