五、HPLC纯度检测样本处理过程(SEC-HPLC) 1.系统平衡:使用与样品稀释相同的缓冲液,平衡SEC-HPLC系统,直到基线稳定。 2.加载样品:通过自动进样器或手动方式,将准备好的样品加载到色谱系统中。 3.洗脱和检测:以恒定的流速通过色谱柱,蛋白质将根据其大小依次洗脱,并通过检测器(通常为紫外检测器)记录洗脱曲线。 六、...
根据SEC-HPLC的结果可以判断样品的纯度情况,如果样品的纯度较高可以进一步进行下一步的实验或应用,如果样品的纯度较低可能需要进行进一步的纯化步骤,如亲和层析、离子交换层析等。 SEC-HPLC是一种常用的蛋白质纯度检测方法,通过分析蛋白质样品在凝胶柱中的分离情况可以评估样品的纯度。在进行SEC-HPLC检测时,需要准备好合...
SEC-HPLC进行蛋白纯度分析时出现蛋白粘柱子是因为蛋白与柱填料发生了可逆或不可逆的相互作用，导致峰展宽...
SEC-HPLC(尺寸排阻高效液相色谱)主要用于检测蛋白质的纯度以及分子大小分布。 原理 SEC-HPLC是一种基于分子大小分离的HPLC技术。它利用具有不同孔径的固定相(填料)对样品中的蛋白质进行分离,使得大分子先于小分子通过色谱柱,从而实现蛋白质的分离和纯度分析。具体来说,当蛋白质样品被注入到SEC-HPLC系统中后,它们会在...
通过优化SEC-HPLC方法，我们可以提高蛋白质纯度的测定精度和灵敏度，为蛋白质研究和生物药物开发提供有力支持。1.高效SEC-HPLC的原理 高效SEC-HPLC利用分子筛柱对蛋白质进行分子大小的分离，从而实现对蛋白质纯度的检测。较大分子量的蛋白质会较快地通过柱床，而较小分子量的杂质则会滞留更长时间。通过检测样品中...
不同杂质在SEC-HPLC图上有不同保留时间。峰面积大小反映了溶瘤腺病毒及杂质的含量。通过峰面积计算溶瘤腺病毒的纯度。纯度计算公式依据色谱原理和化学计量关系。空白对照实验能排除流动相及系统干扰。进行空白进样检测以获取本底信号。仪器的稳定性对测定结果影响不容忽视。定期对仪器进行校准维护保证稳定运行。方法的...
还可以根据SEC从污染物等低分子量物质中分离生物分子（例如蛋白质），这些污染物中可包括聚集体（单体、二聚体、三聚体、四聚体等）、赋形剂、细胞碎片及其他降解产生的杂质。通过优化和改进SEC-HPLC方法，提高蛋白质纯度分析的准确性和灵敏度，为蛋白质研究和生物药物开发提供可靠的数据支持。建立SEC方法时，应对多个...
SEC-HPLC是一种常用的蛋白质纯度检测方法,通过分析蛋白质样品在凝胶柱中的分离情况,可以评估样品的纯度。在进行SEC-HPLC检测时,需要准备好合适的设备和试剂,进行样品制备和注射,设置合适的流动相条件和检测器参数,最后进行数据分析和结果解释。这个方法在生物科技和药物研发领域中具有广泛的应用。
- HPLC纯度(分子筛) - SEC-MALS分子量 SEC-MALS原理 SEC:尺寸排阻色谱法;有时称为GPC/GFC,即凝胶渗透色谱法或凝胶过滤色谱法。 GPC/SEC是根据不同的分子具有不同的流体体积而进行分离,而不是根据分子的分子量大小。色谱柱中填充了表面具有很多小孔的填料颗粒。当样品分子随流动相一起流经填料时,尺寸较小的分...
高效SEC-HPLC是一种可靠、准确的蛋白质纯度检测方法,对于生物药物研发和质量控制具有重要意义。通过优化和改进SEC-HPLC方法,我们可以提高蛋白质纯度分析的准确性和灵敏度,为蛋白质研究和生物药物开发提供可靠的数据支持。在进行高效SEC-HPLC分析时,科研人员应综合考虑样品特性和实验要求,并遵循最佳实践指南以确保结果的准确...