1,提取蛋白的时候要充分超声粉碎,然后高速离心.吸取上清的时候不要触到沉淀.污染不一定是RNA和DNA,还有可能是胶里面有杂质.2.遇热膨胀过度,你可以在电泳槽里面安放冰槽,电泳液预先 结果一 题目 双向电泳第二步SDS-PAGE跑胶的问题主要有2个问题:第一:跑出来的胶有很多的横着竖着的条带,不知道是蛋白没有分开还...
11、跑胶:上电泳槽夹板时一定要平整,不能一边高低,否则漏液。夹好后加入1*电泳液看看是否漏液,如无漏液,则可用, 12、拔梳子:一定要慢慢的垂直向上用力,不能左右歪。否则把柱子弄歪了,不能上样,这可是有血的教训的。 13、上样:marker在-20冰箱中,如有多块胶,可以把mark放在不同位置,以示区分。上样时...
注意煮后的样本一定记得离心,这个步骤很关键。 2)原因二:胶的问题 条带轻度拖尾、弥散现象,如果样本没有问题,那可以考虑一下胶的问题。参考marker,marker如果也出现拖尾等现象,是否你的胶放置太久(自己配置的超过1周,且保存不当),配胶步骤是否出了问题。 解决办法:换一块新配置的胶试一试。 3)原因三:电压、电...
【实验】SDS-PAGE蛋白凝胶电泳的基本原理,操作方法,注意事项,制胶,上样,跑胶,观察,拍照,蛋白胶,保姆级教程 6.2万播放 qPCR数据处理及分析作图 25.1万播放 qPCR数据处理分析及作图(GraphPad Prism) 27.6万播放 【过表达质粒引物设计】Primer 5 软件搞起来 9081播放04...
2、点样:用20µL的小枪头,吸煮过的样品10µL,对准胶孔点样,注意不要把样品点在外面。使用适当的分子量蛋白marker。 3、电泳:电泳仪正负极接好,打开电源。浓缩胶:电压 low 100V,分离胶:电压 high 150V。 4、卸胶:等胶内的所有的蓝色都跑出去,电泳停止,一般时间为1-2小时左右。把胶板从电泳仪上卸...
A:“鬼带”就是在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时,常会出现在泳道顶端(有时在浓缩胶中)的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀,主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性,致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合,聚合成大分子,其分子量要比目标条带大,有时不能进入分离胶。但它却于目标...
1 关于SDS-PAGE电泳 小弟最近在做SDS-PAGE,发现了一些问题 1.胶凝固后会缩一点点,导致加样孔变浅 2.两边的两个孔加样后跑出来的条带不直 不知是否正常,如果不正常问题可能是什么原因造成的 不要复制长编大论,电泳的书我有 因为我做的是不连续电泳,而且是薄胶,最后加胶都是满出来的,没加封胶面的液体...
【实验】SDS-PAGE蛋白凝胶电泳的基本原理,操作方法,注意事项,制胶,上样,跑胶,观察,拍照,蛋白胶,保姆级教程 6.2万播放 生物化学-05-脂类代谢-饱和偶数碳原子脂肪酸的分解代谢。 17.7万播放 1分子α-酮戊二酸彻底氧化分解生成多少ATP(一) 9873播放 三分钟学完糖酵解的过程 2.1万播放 20种氨基酸 2句口诀一分钟...
7、两边翘中间凹形条带是什么情况? 原因:凝胶的中间部分凝固不均匀,多出现于较厚的凝胶中。 解决:充分凝固再作后续实验。 8、两边向下中间鼓起形条带什么情况? 原因:两板之间的底部间隙气泡没有排净。 解决:可在两板间加入适量缓冲液。 9、跑出来的胶有很多的横着竖着的条带,这是什么原因?
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