溶解后,再加入BPB,进行溶解; 2、把溶好的buffer分装到1.5ml的离心管中,1ml/管,常温放置; 3、使用前,每管加入30µL巯基乙醇。 注意事项:巯基乙醇为危险品,加入的过程在通风橱中完成,并且带好手套。 二、10×PBS的配制 0.1M PBS(10×PBS) 1L NaH2PO4.2H2O 2.83g Nacl 85g Na2HPO4.12H2O 28.98g 1、...
5×SDS-PAGE Loading Buffer配制方法 组份浓度: 250mMTris-HCl(pH6.8) 10%(W/V)SDS 0.5%(W/V)BPB(溴酚兰) 50%(V/V)甘油 5%(W/V)β-巯基乙醇 配制量:5mL 配制方法: 1.量取下列试剂,置于10mL塑料离心管中。 1MTris-HCl1.25mL SDS0.5g BPB25mg 甘油2.5mL 2.加入去离子水溶解后定容至5mL。 3....
另:Takara公司Catalog-N5上的5×SDS－PAGE Loading Buffer配方：组分浓度：配制量5 ml 配制方法 1．称量下列试剂置于10ml塑料离心管中。2．加去离子水溶解后定容至5 ml。3．小份（500 ul/份）分装后于室温保存。4．使用前将25 ul的2-ME加到每小份中。5．加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右...
将收集的各样品加入等体积的 2×SDS-PAGE Loading Buffer,煮沸裂解 5min,冰浴 2min,12,000rpm 离心 10min,取上清-20℃保存备用。 SDS-PAGE 蛋白质电泳(参照分子克隆实验指南操作)(萨姆布鲁克,2002) 1)按照电泳装置的使用说明,装好洁净干燥的玻璃板。 2)分离胶的制备 按下列成分配制10mL 12%分离胶: 各成分...
蛋白样品,SDS-PAGE loading buffer,PBS,Tris-Hcl (PH 8.8), Tris-Hcl (PH 6.8) ,30%丙烯酰胺,10%SDS,10%过硫酸,5×SDS-PAGE电泳缓冲液,考马斯亮蓝R-250染色液,脱色液。 实验步骤 一、凝胶配置 1.分离胶的配制 (1)找出配套的...
我想说以下几点:1.SDS-PAGE loading buffer一般配成2X 的,5X loading buffer确实过于粘稠,且SDS在低温下难溶于水,这就导致你配的buffer“摇都摇不动”了2.不知你为何要配那么多loading buffer(况且是5X的),这些东西都是用量很少的,建议你少配些,比如……10 ml?3.以下就以2X loading buffer(配制10 ml)为...
回答者:网友 5×SDS-PAGE Loading Buffer的配制(10 ml) (本方案摘自《蛋白质技术手册》汪家政、范明) 组分:Tris-HCl pH6.8(60 mM);SDS (2%);溴酚兰(0.1%);甘油(25%);β-巯基乙醇(14.4 mM) 配制过程: 1. 量取1M Tris-HCl (pH6.8) 0.6 ml。我...
加入卩-巯基乙醇的上样Buffer可以在室温下保存一个月左右。5xSDSLoadingBuffer的配制(方案二):(10ml)(本方案摘自蛋白质技术手册汪家政、范明)组分:Tr 3、is-HCIpH6.8(60mM);SDS(2%);溴酚兰(0.1%);甘油(25%);卩-巯基乙醇(14.4mM)配制过程:量取1MTris-HCI(pH6.8)0.6ml;50%的甘油5ml;10%的SDS溶液2ml;1%...
上样缓冲液（5×）：（5×loading buffer）有 10%（W/V,g/ml）过硫酸铵（APs）的配制：（1ml）1.称取0.1g过硫酸铵；2.加入1ml的去离子水，将固体粉末彻底溶解；3.贮存于4℃。注意：10%过硫酸铵最好现配现用，配好的溶液在4℃保存可使用2周左右，过期会失去催化效果。5×Tris-Glycine电泳缓冲液的...