不像组织切片HE染色, 免疫组化和免疫荧光那样可重复(见本人另一文章石蜡切片和冰冻切片之高质量HE染色、免疫组化、免疫荧光染色),Western blot常常被我们叫做"玄学",因为这门技术让人琢磨不透,很难做到结果可重复,明明上了相同体积的同个样品,可常常出现复孔的条带趋势不一致。然而,经过笔者硕士期间反复用心琢磨,...
(1)当我们把混合样品通过SDS-PAGE电泳分离之后,理论上可以通过所得条带的分子量来鉴定目的蛋白是否存在,但是这种鉴定受到很多因素的干扰,非常不准确。因此我们需要进一步使用Western blot (蛋白质印迹法)来鉴定血清中的IgG含量的多少。 凝胶上的蛋白质条带 (2)Western blot属于印迹法,是样品经过电泳分离后,转印至膜...
因此，SDS-PAGE和Western blot虽然都涉及到SDS和聚丙烯酰胺凝胶，但它们在应用上有明显区别。SDS-PAGE主要用于蛋白质的分离，而Western blot则侧重于特定蛋白质的检测。两者结合使用可以更全面地分析蛋白质。在SDS-PAGE过程中，蛋白质被赋予相同的电荷密度，使得分子大小成为决定其迁移率的关键因素。而在Weste...
SDS-PAGEandWesternBlot •试剂准备•样品准备•含量测定 •SDS-PAGE •转膜•免疫反应•化学发光•凝胶图像分析 SDS-PAGE •十二烷基磺酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE，polyacrylamidegelelectrophoresis）•聚丙稀酰胺是由丙稀酰胺（acrylamide）和N,N’-亚甲基双丙稀酰胺（N,N’-methylenebis...
蛋白质是调节机体生理水平的重要指标,因此蛋白质在病理研究中起着至关重要的作用,同时蛋白质对于临床和学术研究也有重大意义。Western Blot是运用免疫学的方法能对蛋白质进行定性和定量分析的一项重要技术,所以运用Western Blot的技术不仅对临床应用有重要意义,而且同时也能为学术研究提供更有效的信息。
二、蛋白质印迹免疫分析(Western Blot) 1、蛋白质转膜 (1)取下胶板,小心去除一侧玻璃板,切去浓缩胶和分离胶无样品的部分,将凝胶分成两半,含分子量标准的部分用考马斯亮蓝染色。 (2)精确测量剩余胶的大小,按该尺寸剪取一张硝酸纤维素膜和两张滤纸(BioRad专用),在转移缓冲液中将膜和滤纸浸泡15分钟。
原核表达,SDS-PAGE,Western-Blot 原核表达 将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点:易于生长和控制;用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵;有各种各样的大肠杆菌菌株及与之...
https://www.xuetangx.com/learn/sysuP10070118/sysuP10070118/10372101/video/17700782?channel=i.area.manual_search, 视频播放量 520、弹幕量 0、点赞数 13、投硬币枚数 2、收藏人数 28、转发人数 6, 视频作者 分子细胞生化, 作者简介 一个沉迷于生命科学研究的在校生,
SDS-PAGE and Western blot SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳SodiumDodecylSulfatePolyacrylamideGelElectrophoresis(SDS-PAGE)SDS(SodiumDodecylSulfate,十二烷基磺酸钠)磺酸钠•是阴离子去污剂；是阴离子去污剂；•破坏蛋白质分子的二硫键及非共价键，破坏蛋白质分子的二硫键及非共价键，改变其构象为线状分子；...
Tip:通过BCA分析法,分析牛奶中蛋白质的含量,在通过SDS-PAGE和Coomassie Blue染色观察蛋白质电脉冲结果的基础上,进行Western Blot,使membrane transfer,通过实验熟知利用抗原-抗体反应对特定蛋白质进行定量分析和检测的方法 实验方法 蛋白质定量分析法-BCA法