1,提取蛋白的时候要充分超声粉碎,然后高速离心.吸取上清的时候不要触到沉淀.污染不一定是RNA和DNA,还有可能是胶里面有杂质.2.遇热膨胀过度,你可以在电泳槽里面安放冰槽,电泳液预先 结果一 题目 双向电泳第二步SDS-PAGE跑胶的问题主要有2个问题:第一:跑出来的胶有很多的横着竖着的条带,不知道是蛋白没有分开还...
11、跑胶:上电泳槽夹板时一定要平整,不能一边高低,否则漏液。夹好后加入1*电泳液看看是否漏液,如无漏液,则可用, 12、拔梳子:一定要慢慢的垂直向上用力,不能左右歪。否则把柱子弄歪了,不能上样,这可是有血的教训的。 13、上样:marker在-20冰箱中,如有多块胶,可以把mark放在不同位置,以示区分。上样时...
注意煮后的样本一定记得离心,这个步骤很关键。 2)原因二:胶的问题 条带轻度拖尾、弥散现象,如果样本没有问题,那可以考虑一下胶的问题。参考marker,marker如果也出现拖尾等现象,是否你的胶放置太久(自己配置的超过1周,且保存不当),配胶步骤是否出了问题。 解决办法:换一块新配置的胶试一试。 3)原因三:电压、电...
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2、点样：用20µL的小枪头，吸煮过的样品10µL，对准胶孔点样，注意不要把样品点在外面。使用适当的分子量蛋白marker。3、电泳：电泳仪正负极接好，打开电源。浓缩胶：电压 low 100V，分离胶：电压 high 150V。4、卸胶：等胶内的所有的蓝色都跑出去，电泳停止，一般时间为1-2小时左右。把胶板从电泳仪...
如果是当天跑胶,我会等上层胶凝2个小时再用,但要注意防干燥缩水,加完上层胶30分钟后先浸泡于液体中。所以我一般提前一天制胶,第二天就用。 1.3蛋白电泳 1.3.1上样前准备 把玻璃板和胶组装到电泳芯上,注意密闭性(否则漏液),如果内槽漏液就不是匀强电场了,最后条带可能就不是一条直线。然后内槽倒满电泳...
在蛋白纯化过程中，SDS-PAGE跑胶的问题对新手来说无疑是一个挑战。我亲身体验过这个“难题”，耗时半学期才逐渐掌握。问题的复杂性主要源于信息的缺乏和自身理解的不足。遇到样本挂孔、条带拖尾和弥散的情况，通常可以从以下几个方面寻找原因：首先，上样浓度问题不容忽视。过高的样本浓度可能导致挂孔，...
很简单的问题，原因也很简单，做胶的时候不注意细节。这种情况一般出现在拔底面spacer（大板胶通常有底部...
胶条一定要干,跑完电泳后,胶条可放在实验台上晾着。 下面的胶条注意不要老化,如果有裂纹的话可用保鲜膜垫在上面,或者反过来用。 玻璃在使用过程中容易造成小的缺口,从而导致封条无法完全密封。装好架子后,可在玻璃底边抹上一层薄薄的凡士林(两边多点,容易从两边漏)。转移到电泳槽的时候去掉封条,把底上的凡士林...