聚丙烯酰胺凝胶电泳胶液配制 1. 将蒸馏水取2L,通过0.22μm的滤膜过滤3遍来除杂质,备用。 2. 将40%(w/v)丙烯酰胺10mL,在干燥器中烘干2小时,然后加入蒸馏水固定容积至50mL。将10%(w/v)N, N’-二甲基亚硫脲5mL加入均聚化溶液中,搅拌30分钟至完全溶解。 3. 将均聚化溶液加入10%(w/v)的三甲基丙烯酰氨...
• 解决方案：确保梳子与玻璃板匹配，必要时更换。8. 上层胶中电泳出现“漏样”：• 原因：玻璃板与胶局部分离，上样缓冲液问题。• 解决方案：小心取下玻璃板，避免分离，上样时避免枪头插得太深。9. 泳道中心凹陷：• 原因：梳子插入后胶暴露于空气中时间过长。• 解决方案：尽量在 25 分钟内插入...
SDS-PAGE电泳试剂配制SDS-PAGE电泳试剂 1)30%贮备胶溶液:丙烯酰胺(Acr)29.0g,亚甲基双丙烯酰(Bis)1.0g,混匀后加ddH 2O,37OC溶解,定容至100 mL,棕色瓶存于4OC; 2)1.5M Tris-HCl(pH:Tris 18.17g加ddH 2O溶解,浓盐酸调pH至,定容至100mL;3)1M Tris-HCl(pH:Tris 12.11g加 ddH 2O溶解,浓盐酸调pH...
sdspage电泳试剂配制SDS-PAGE电泳试剂 1)30%储备胶溶液:丙烯酰胺(Acr)29.0g,亚甲基双丙烯酰(Bis)1.0g,混匀后加ddH2O,37OC溶解,定容至100 mL,棕色瓶存于4OC; 2)1.5MTris-HCl(pH 8.8):Tris18.17g加ddH2O溶解,浓盐酸调pH至8.0,定容至100mL; 3)1MTris-HCl(pH 6.8):Tris12.11g加ddH2O溶解,浓盐酸调pH...
12%电泳胶的配制(10 mL) Table 12% Gel components Reagents Seperating gel Condensing gel 二块 30% Acr-Bis solution 4 mL 0.67 mL 4×seperating gel buffer 2.5 mL pH8.9 1 mL pH8.9 H2O 3.5 mL 2.3 mL 100 g/L AP 50 μL 30 μL
SDS-PAGE自制胶操作规程 一:试剂准备 SDS-PAGE电泳所用溶液: 30 %聚丙烯酰胺溶液(100 mL) 丙稀酰胺(Arc)29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺(Bis)0.8g,加入去离子水定容至100mL,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。将商品用的40 %聚丙烯酰胺溶液稀释到浓度为30 %,冰箱4℃保存。 分离胶缓冲液1.5mol/L Tris·HCl,pH8.8:...
表2. 配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液 成分 配制不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积/ml 1 2 3 4 5 6 8 10 水 0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 30 %丙烯酰胺混合液 0.17 0.33 0.5 0.67 0.83 1.0 1.3 1.7 1.5 mol/L Tris(pH6.8) 0.13 0.25 0.38 0.50 0.63 0.75 1.0 1.25 ...
0.01 MNaOAc (pH5.2)参照此配方配制。 5×Tris-Glycine Buffer(SDS-PAGE电泳缓冲液) 组分浓度:0.125 M Tris, 1.25 M Glycine, 0.5%(W/V) SDS 1.称量下列试剂置于烧杯中。 2.加入约900 ml去离子水搅拌溶解。 3.定容至1L,室温保存。 (参照《分子克隆》二...
(1) 制备10%的分离胶(梳子插进去 往下1cm,划线) (2)加1ml蒸馏水(液面压平,排气泡) (3) 制备5%的浓缩胶 样品处理 点样 电泳 浓缩胶(80v);分离胶(120v, 30mA) 染色 染色液:0.29 g考马斯亮蓝R250溶解在250ml脱色液中 脱色 脱色液:250 ml 乙醇,80ml冰醋酸,用蒸馏水定容至1000 ml ...