染色的凝胶用水漂洗数遍,沥干水后置于染色皿中,再加入100 ml脱色液,加盖,脱色至染色的凝胶经脱色后能清晰显示出蛋白条带止。
SDS-PAGE检测蛋白表达(protein expression) 一、材料与仪器 30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液,PH8.8;1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液,PH6.8;电泳缓冲液,PH8.3;10%SDS溶液;10%过硫酸铵溶液;样品处理液;染色液;脱色液;电泳玻璃板,电泳电源架,电泳槽, 一、材料与仪器 30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L...
SDS-PAGE跑诱后的话可以检测出来有没有表达,但是检测不出是胞内还是周质表达.要检测周质表达,需要把细胞周质抽提出来再去做SDS-PAGE 结果一 题目 若表达蛋白是周质表达 用sds-page能不能检测出来 答案 SDS-PAGE跑诱后的话可以检测出来有没有表达,但是检测不出是胞内还是周质表达.要检测周质表达,需要把细胞周质抽...
12.将测得的OD值带入BCA标准曲线计算出蛋白浓度,将浓度最小的数值作为统一浓度,算得一个蛋白和裂解液共100ul的上样体系,在该体系中加入25ul5X蛋白上样缓冲液(5X loading buffer),用手指轻弹PCR管混匀; 13.将装有上样体系的200ulPCR管放入水浴锅中95-100°C变性10分钟,变性后所得样品即可用于SDS- PAGE凝胶...
且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相 载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。操作步骤 1、SDS－PAGE电泳2、转膜3、免疫反应 4、化学发光 5、凝胶图象分析 ...
考马斯亮蓝用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后的蛋白质染色,蛋白质对染料的吸附量与蛋白质的量大致成正比,符合比尔-朗勃定律。目前已经建立了很多用银盐对SDS-PAGE分离的多肽染色的方法,基本原理都是利用银离子结合在氨基酸侧链上之后还原程度的差异。常用的银盐有银铵溶液和硝酸银,检测灵敏度都高出考马斯亮蓝R-250染色100~...
1.目的 学习SDS-PAGE的基本操作,学会用SDS-PAGE检测蛋白。 2.原理 蛋白质在加热变性以后与SDS结合,带上负电荷,在电场的作用下,向正极移动,结果按分子量大小排列在胶板上,含量多的蛋白带纹粗。 3.器材 旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,1.5m
1.目的 学习SDS-PAGE的基本操作,学会用SDS-PAGE检测蛋白。 2.原理 蛋白质在加热变性以后与SDS结合,带上负电荷,在电场的作用下,向正极移动,结果按分子量大小排列在胶板上,含量多的蛋白带纹粗。 3.器材 旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,1.5ml 微量离心管,
SDS-PAGE和Westernblot法 检测表达蛋白AKP 北京师范大学杨冬 以聚丙烯酰胺凝胶作为支持物而进行的电泳 使待测蛋白质在电泳中按分子量大小在板状胶 上排列 包括制备分离胶与浓缩胶、电泳、检测等过程 1实验背景 SDS-PAGE 1实验背景 当分子量在1.5×10 4 ~2×10 5 时,蛋 白质的迁移率和分子量的对数呈线性 关...
SDS-PAGE的检出限大约是在25~50纳克之间，如果蛋白的表达量低于SDS-PAGE检出限的话，可以考虑用Western-Blot检测。