Western bloting技术是用来检测蛋白表达的特定的灵敏的方法,由蛋白质的SDS-PAGE、电转及杂交几部分组成。杂交技术主要有NC膜封闭,靶蛋白与第一抗体的反应,结合靶蛋白的一抗和二抗的反应,显色等组成。将凝胶上的蛋白质转移到NC膜上,用其他蛋白作为封闭液,将膜上余下的其他蛋白结合位点封闭,加入与检测蛋白特异性的第...
SDS-PAGE检测蛋白表达(protein expression) 一、材料与仪器 30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液,PH8.8;1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液,PH6.8;电泳缓冲液,PH8.3;10%SDS溶液;10%过硫酸铵溶液;样品处理液;染色液;脱色液;电泳玻璃板,电泳电源架,电泳槽, 一、材料与仪器 30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L...
对于诱导表达后的菌液来说,OD值一般都会大于2.0,直接菌液离心重悬煮样上SDS,就会出现挂孔现象,挂空滤百分百,在加样的时候也会看出来,样本是一小坨掉入孔底,而不是很顺滑的流入孔底。其次,煮后的样本没离心,也会出现挂空现象,这个挂空几率就得看你的蛋白浓度。 解决办法:5X或者10X稀释重悬后的菌液,然后正常...
染色的凝胶用水漂洗数遍,沥干水后置于染色皿中,再加入100 ml脱色液,加盖,脱色至染色的凝胶经脱色后能清晰显示出蛋白条带止。
1.掌握SDS-PAGE电泳的操作步骤。 2.学会用电泳图分析原核表达效果 二、实验原理 聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。SDS-PAGE仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。该技术最初由shapiro于1967年建立,他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂(SDS即十二烷基磺酸钠)后,蛋白质亚基...
SDS-PAGE是一种常用的测定蛋白质相对分子质量的方法。它利用十二烷基硫酸钠(SDS)与蛋白质的结合性质,将蛋白质变性并带负电荷,使得蛋白质在电场中的迁移率仅取决于相对分子质量,而与蛋白质的等电点、电荷性质无关。通过比较标准蛋白质的迁移率和已知相对分子质量的蛋白质,可确定待测蛋白质的相对分子质量。 三、实验...
免疫印迹,SDS-PAGE,蛋白定量 三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器 材料 1.5mlEP管(康宁生命科学有限公司);15mlEP管(康宁生命科学有限公司);50mlEP管(康宁生命科学有限公司);1000ml量筒;200ml量筒;100ml量筒;10ml量筒;研磨珠、1000ul移液枪(Eppendorf);200ul移液枪(Eppendorf)、100ul移液枪(Eppendorf);20ul移液...
2.Western blot（蛋白质印迹法）的实验原理 （1）当我们把混合样品通过SDS-PAGE电泳分离之后，理论上...
实验12蛋白表达的SDS-PAGE检测实验目的: 使学生掌握蛋白质电泳检测常用技术:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulfate polyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE),以及聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝(Coomassie BrilliantBlue,R-250)染色技术。同时此实验还要学生掌握如何检测分析蛋白原核表达的状态,即判断蛋白原 ...
通常情况下，丙烯酰胺的浓度为15%、12.5%、10%、7.5%、5.0%时，SDS-PAGE蛋白范围分别为15-43.5kDa、15-60kDa、18-75kDa、30-120kDa、60-212kDa。因此，在进行蛋白SDS-PAGE检测之前，需要预估目标蛋白的分子量大小，然后通过SDS-PAGE实验进行验证。若无法预知目标蛋白分子量大小，则可优先选择蛋白分子量检测...