4、制备分离胶(下层胶) 按照配方表依次加入相应体积的试剂(1.0mm玻璃板一块胶总体积5.0ml,1.5mm玻璃板一块胶总体积7.5ml足矣),加完SDS后加APS前可以先混匀,然后迅速加入APS和TEMED,马上混匀(手摇或者振荡器摇匀),灌胶,注意胶的高度,要留有足够的空间给压缩胶,一般压缩胶的深度要求是梳子下缘再往下1厘米左右。然后
对于蛋白纯化中SDS-PAGE跑胶问题,小编是有发言权的。对于当时还是蛋白纯化小白的小编来说,这个 “坑”反复跳了半学期才逐渐发现问题(哭死~)。为什么这么久才发现,一方面自己做实验反应较迟钝,另一方面网上也没有一个说明白的,只能从网络夹缝中查到那么一点点看上去合理的信息。那么,话不多说,上干货。 出现图1-...
蛋白表达SDSPAGE跑胶问题总结如下：上样浓度问题：过高的样本浓度：过高的样本浓度可能导致挂孔现象。直接用高OD值的菌液离心后煮样，容易产生挂孔。建议将菌液适当稀释后煮样，离心后再上样。胶的问题：胶的保存与配置：如果样本无误，而marker出现同样的问题，可能是胶的问题。检查胶的保存是否得当，...
主要有2个问题:第一:跑出来的胶有很多的横着竖着的条带,不知道是蛋白没有分开还是怎么的.看Bio-Rad上面写的问题分析说可能是蛋白被污染了,所以加了DNAse I和RNase A在最开始的蛋白里面,不过效果还是不好,依然有很多条带.第二:把第一条strip放在成品胶(SDS-PAGE的那个胶)顶部,用琼脂(agarose)凝固了2个小时,...
在分子生物学和生物化学的实验中，跑胶是一种常见的操作。它主要分为跑琼脂糖胶和SDS-PAGE胶，此外还有非变性胶等类型，但本文将主要聚焦于前两者。接下来，我们将深入探讨琼脂糖凝胶电泳的原理与应用。△ 琼脂糖凝胶电泳原理与应用 琼脂糖，这种由D-和L-半乳糖残基通过糖苷键交替连接而成的线状聚合物，构成了...
蛋白表达后一般会用SDS-PAGE(SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳)来检测目的蛋白,我们针对跑胶中常常出现的问题进行归纳整理,并附有解决方法。
关于SDS-PAGE..关于SDS-PAGE 蛋白电泳的常见问题分析1. 关于凝胶的一些问题1. 胶的凝结不好,例如有花纹特别是浓度高的胶在冬天温度较低的情况下,在分离胶的下部有波浪样的花纹,凝胶不均匀。解决方法:加大 TE
可能是浓缩胶的量不足，导致蛋白未能充分压缩就直接进入分离胶，或者是浓缩胶的配方存在问题，效果不佳。此外，还有条带变形的情况，这可能是由于凝胶表面不平整，导致部分条带呈现出弧形。接下来，我们讨论第二张图。目标条带是存在的（椭圆标注处）。但我不清楚您在这张图中跑的蛋白是否与第一张图一致。第二张...
在蛋白纯化过程中，SDS-PAGE跑胶的问题对新手来说无疑是一个挑战。我亲身体验过这个“难题”，耗时半学期才逐渐掌握。问题的复杂性主要源于信息的缺乏和自身理解的不足。遇到样本挂孔、条带拖尾和弥散的情况，通常可以从以下几个方面寻找原因：首先，上样浓度问题不容忽视。过高的样本浓度可能导致挂孔，...