1)原因一:上样浓度问题 样本重度挂孔、拖尾、弥散,首先考虑上样浓度问题,浓度太高80%会出现样本挂孔拖尾现象,样本沉淀在加样孔上。对于诱导表达后的菌液来说,OD值一般都会大于2.0,直接菌液离心重悬煮样上SDS,就会出现挂孔现象,挂空滤百分百,在加样的时候也会看出来,样本是一小坨掉入孔底,而不是很顺滑的流入...
在蛋白纯化过程中，SDS-PAGE跑胶的问题对新手来说无疑是一个挑战。我亲身体验过这个“难题”，耗时半学期才逐渐掌握。问题的复杂性主要源于信息的缺乏和自身理解的不足。遇到样本挂孔、条带拖尾和弥散的情况，通常可以从以下几个方面寻找原因：首先，上样浓度问题不容忽视。过高的样本浓度可能导致挂孔，...
14、跑胶:上架,注意黑对黑,红对红,外槽加电泳回收液,加至2gel处即可。上盖,也要注意对上颜色,通电,电压80v把marker跑出来后调电压至120v。跑30-40分钟就差不多了,主要注意跑道下缘位置。 15、下架,切胶:用切角板小心撬开两块玻璃,然后上缘沿分离胶和浓缩胶之间切开,下缘沿marker的最后一条绿线切下,当...
如何解决SDS-PAGE电泳漏胶问题 漏胶原因: 玻璃板没对齐; 玻璃板底部缺损; 厚玻璃板边条密闭性不良; 塑料夹子太松... 解决办法: 确保玻璃板干燥,因为潮湿的玻璃板会产生很强的吸附力,使其对齐变得困难。正确的操作技巧是:一手用食指指腹按压厚玻璃板的一侧上缘,同时用拇指指腹按压薄玻璃板同侧的上缘,然后同时向...
条带出现弯曲的情况，通常会让人联想到一个哭脸的形状，这种情况的出现主要有两个原因。首先，电泳缓冲液的不干净是导致条带弯曲的一个重要原因。电泳缓冲液是维持电泳过程稳定进行的关键因素，如果缓冲液含有杂质，可能会干扰蛋白质的迁移，导致条带弯曲。因此，使用高质量、干净的电泳缓冲液对于确保电泳...
蛋白表达后一般会用SDS-PAGE(SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳)来检测目的蛋白,我们针对跑胶中常常出现的问题进行归纳整理,并附有解决方法。
SDS-PAGE电泳胶一半跑不下去可能是以下原因：1. 样品没有处理好，需要重新处理。2. 缓冲液不新鲜，需要更换新的缓冲液。3. 电压过高或过低，需要调整电压。4. 电泳温度过高或过低，需要调整电泳温度。5. 电泳时间过长或过短，需要调整电泳时间。6. 凝胶配制时没有混合均匀或胶中有气泡，需要重新配制...
主要有2个问题:第一:跑出来的胶有很多的横着竖着的条带,不知道是蛋白没有分开还是怎么的.看Bio-Rad上面写的问题分析说可能是蛋白被污染了,所以加了DNAse I和RNase A在最开始的蛋白里面,不过效果还是不好,依然有很多条带.第二:把第一条strip放在成品胶(SDS-PAGE的那个胶)顶部,用琼脂(agarose)凝固了2个小时,...
很简单的问题,原因也很简单,做胶的时候不注意细节。这种情况一般出现在拔底面spacer(大板胶通常有底部的封条)和样孔梳子的时候。原因有四种可能:1. 梳子过紧。梳子或底边spacer的宽度和两边spacer的宽度有极细微的差别(质量不合格或不配套),使得勉强用力拔梳子的过程中,造成玻板的错动。通常除梳孔漏样外,玻板底...