接下来是浓缩胶缓冲液,通常是10M TrisHCl(pH 68)。同样配制100ml,称取1211g Tris碱,加入约80ml去离子水,用浓盐酸调pH至68,最后定容至100ml。 然后是30%丙烯酰胺溶液。这是SDSPAGE电泳中非常重要的试剂。配制100ml该溶液,需要称取29g丙烯酰胺和1g N,N’亚甲双丙烯酰胺,用去离子水溶解后定容至100ml。丙烯酰...
下面我们将介绍SDS-PAGE电泳试剂的配制方法。 聚丙烯酰胺凝胶电泳胶液配制 1. 将蒸馏水取2L,通过0.22μm的滤膜过滤3遍来除杂质,备用。 2. 将40%(w/v)丙烯酰胺10mL,在干燥器中烘干2小时,然后加入蒸馏水固定容积至50mL。将10%(w/v)N, N’-二甲基亚硫脲5mL加入均聚化溶液中,搅拌30分钟至完全溶解。 3. ...
0.01 MNaOAc (pH5.2) 参照此配方配制。5×Tris-Glycine Buffer（SDS-PAGE电泳缓冲液）组分浓度：0.125 M Tris, 1.25 M Glycine, 0.5%(W/V) SDS 1．称量下列试剂置于烧杯中。2．加入约900 ml去离子水搅拌溶解。3．定容至1L，室温保存。（参照《分子克隆》二版P884）Transfer Buffer:[自配]Transfer B...
• 使用垫片将玻璃板组装在稳定、均匀的表面上，确保组装紧锁夹子，检查玻璃板完好性。3. 配制分离胶溶液：• 在干燥、干净的烧杯中按照配方表中的比例混合水、30%丙烯酰胺、1.5 M Tris-HCl (pH 8.8)、10% SDS、10% APS 和 TEMED。TEMED必须是最后 加入的成分。• 搅拌均匀后，立即倒入组装好的玻...
(4)10 g/L 溴酚蓝溶液:500 mg溴酚蓝加双蒸水50 mL,搅拌溶解,倒入棕色玻璃试剂瓶中,4 ℃冰箱保存。不用过滤。用时注意吸取上层澄清液,不要吸到沉淀。 【二】电泳工作液配制(均4℃冰箱保存,用完放回) (1)Acr-Bis液(丙烯酰胺溶液)500 mL...
2、按照上面配方制SDS-PAGE凝胶,安装好电泳仪,在槽中加入电极缓冲液。 3、按一定顺序在加样孔中加入样品。 4、打开电源将电压调到80v,待样品跑过压缩胶后将电压调到120v至样品电泳到胶底部为止。 5、将凝胶小心取下放入容器中,加入染色液,用摇床摇2-3h 6、待条带清晰后倒出染色液,加入脱色液过夜 7、将脱色...
1Tricine — SDS — PAGE蛋白质电泳溶液准备 1)正极缓冲液(10×):14gTris溶于400mL重蒸水,用1。0MHCl调至pH8。 9 ,定容至500mL。 2)负极缓冲液(10×):将60。55gTris ,89.58gTricine及5gSDS溶于400ml重蒸水中,加水至终体积为500mL。 3)凝胶缓冲液(3×):将181。5gTris ,1.5gSDS溶于400mL重蒸水...
SDS PAGE又称聚丙烯酰胺凝胶电泳(英语: polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE) 作用:用于分离蛋白质和寡核苷酸。 SDS PAGE的配制方法 将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热(37℃左右)的去离子水中,充分搅拌溶解,补加水至终体积为100ml。0.45μm微孔滤膜过滤除菌和杂质,储于棕色瓶,...