运行一个含有已知浓度蛋白标准的凝胶,以创建一个蛋白浓度与凝胶上条带颜色深浅(灰度值)之间的关系曲线。 通常使用由一系列不同浓度的蛋白标准制备的SDS-PAGE来创建这一标准曲线。 2.样品条带的灰度分析: 使用适当的软件(例如ImageJ)来分析样品在SDS-PAGE图上的条带的灰度值。 确保在分析时,背景已被适当减去以避...
1、 SDS与蛋白质的结合按质量成比例(即:1.4gSDS/g蛋白质),如果比例不当,就不能得到准确的数据。 2、 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时,必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。 3、 有些蛋白质由亚基(如血红蛋白)或两条以上肽链(α-胰凝乳蛋白酶)组成的,它们在巯基乙醇和...
一般来说,对于大部分的SDS-PAGE实验,每个样品孔的上样量通常在10-50微克之间。具体的上样量取决于你的实验目的和样品的性质。 一旦你确定了你的样品中蛋白质的浓度和你想要的上样量,你就可以计算出需要上样的体积。 公式是:上样体积(µl) = 上样量(µg) / 蛋白质浓度(µg/µl)。 在SDS-PAGE实...
通常情况下，丙烯酰胺的浓度为15%、12.5%、10%、7.5%、5.0%时，SDS-PAGE蛋白范围分别为15-43.5kDa、15-60kDa、18-75kDa、30-120kDa、60-212kDa。因此，在进行蛋白SDS-PAGE检测之前，需要预估目标蛋白的分子量大小，然后通过SDS-PAGE实验进行验证。若无法预知目标蛋白分子量大小，则可优先选择蛋白分子量检测...
8.根据所测定的蛋白浓度,使用5×SDS蛋白上样缓冲液和RIPA缓冲液,配制终浓度为0.2μg/μl的上样液。 9.配好后盖上管盖,放入沸水中孵育3-5min,使蛋白质变性。 10.变性后从沸水中取出样品,室温静置一段时间后,室温离心: 8,000g,1min。 11.上样:在...
蛋白质SDS-PAGE分析流程 1. 蛋白质浓度检测 2. 样品处理:在蛋白样品中加入等量含有B-巯基乙醇的2x loading buffer,煮沸10分钟 3. 电泳准备:配置合适浓度的SDS分离胶,安装电泳槽,注入1x 电泳液 4. 蛋白质样品上样:根据蛋白质浓度,取适量处理过的蛋白样品依次加入电泳孔槽内,另外取适量蛋白标准marker加入其他空余...
牛奶中约含有5%的蛋白质,1ml牛奶中约含有5mg, BCA法的定量范围是20 ~ 2000μg/ ml,将其稀释为1/100,Epp。装在tube里 白蛋白标准安瓶的浓度为2.0mg/ml,所以给到6个tube中后,利用稀释法将standard的浓度设定为2000,1000,500,250,125,0ug/ml
SDS-PAGE一般采用不连续凝胶系统，即含有不同孔径的两层凝胶：上层胶（5%浓缩胶）和下层胶（分离胶），浓缩胶孔径较大，不同大小的蛋白质分子泳动速率相同，较稀的样本经过浓缩胶的迁移作用被浓缩至一个狭窄的区带，当进入小孔径的分离胶后，不同大小蛋白质由于所带电荷不同，表现出不同的迁移率，由于分子筛效应...
并按一定比例（SDS浓度大于1mmol/L时，1g蛋白质约结合1.4gSDS）与蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电的量远远大于其本身的电荷量，掩盖了各种蛋白质分子间天然的电荷差异。指示染料移动距离：从分离胶起点至指示剂前沿的距离；蛋白质样品移动距离：从分离胶电泳起始部位至蛋白质染色区带前缘间的距离。