2、按照上面配方制SDS-PAGE凝胶,安装好电泳仪,在槽中加入电极缓冲液。 3、按一定顺序在加样孔中加入样品。 4、打开电源将电压调到80v,待样品跑过压缩胶后将电压调到120v至样品电泳到胶底部为止。 5、将凝胶小心取下放入容器中,加入染色液,用摇床摇2-3h 6、待条带清晰后倒出染色液,加入脱色液过夜 7、将脱色...
-用于染色聚丙烯酰胺凝胶上分离的蛋白质。 -配方为: 0.1%(w/v)Coomassie blue R-250 50%(v/v)甲醇 10%(v/v)醋酸 水,足够使总体积达到10ml 用溶液染色凝胶,并尽量避免光照。 以上是SDS-常用的试剂配方及其详细说明,这些试剂是进行聚丙烯酰胺凝胶电泳实验所必需的,能够帮助分离和分析蛋白质样品。©...
在实验室中,SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)是一种常用的蛋白质分离技术。今天,我们将深入探讨SDS-PAGE预混胶的配方,以及如何使用不同的染色方法。📖 预混胶配方指南 分离胶的百分比(如6%、10%等)是根据丙烯酰胺含量来确定的。其他成分包括Tri浓度为0.375M,SDS浓度为0.1%,TEMED和APS作为促凝剂,含量...
5×SDS-PAGE电泳缓冲液 1L Tris 15.1g Glycine(甘氨酸) 94g SDS 5g 将以上药品用去离子水溶解后定容到1L,常温保存。工作时用的是1×SDS-PAGE电泳缓冲液。 九、考马斯亮蓝R-250染色液的配制 1、往1g考马斯亮蓝R-250中加入250ml异丙醇,在磁力搅拌器上搅拌六小时以上; 2、加入650ml去离子水,磁力搅拌器搅拌...
电泳仪与电源 考马斯亮蓝染色液(或其他染色液) 实验步骤 一、制备SDS-PAGE凝胶 准备分离胶和浓缩胶按照不同的蛋白质大小,选择合适的分离胶浓度(常见为10-15%)。具体配方如下:分离胶(Resolving Gel)配方: 水 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(Acrylamide-Bis solution) 1.5 M Tris-HCl (pH 8.8) 10% SDS 10% ...
SDS-PAGE试剂配方SDS-PAGE电泳所用溶液: 30%聚丙烯酰胺溶液 (100 mL) 丙烯酰胺(Arc)29 g N,N’-亚甲双丙烯酰胺(Bis)1 g 用双蒸水定容至100mL,过滤备用,4℃存放 丙稀酰胺29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g,加入去离子水定容至100mL,pH值不能超过7.0,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。 5×Tris-甘氨酸缓冲液 ...
sds-page 试剂配制 SDS-PAGE 试剂配制 凝胶脱色染色方法：溶液1：无水乙醇250mL，冰醋酸50mL，水200mL；溶液2：无水乙醇50mL，冰醋酸37.5mL，水437.5mL；溶液3：0.25g考马斯亮蓝R-250 溶于100mL 95%乙醇中，滤纸过滤，待用。电泳结束，取出胶放在胶盒中，加约50mL溶液1，微波炉加热1min，摇床摇10-20nin；...
染色液请倒入专用的回收容器内。以自来水小心地淋洗凝胶冲去剩余染料,然后倒入适量的脱色液,微波加热至刚沸腾后于染色摇床上摇动约10 min,倒掉脱色液,此时凝胶的蛋白条带即可看清。重复以上脱色步骤一次,即可看清电泳条带。扫描凝胶蛋白条带需要完全脱掉背景颜色,这...
一、SDS-PAGE凝胶电泳原理 SDS-PAGE凝胶电泳是将蛋白样品加入样品处理液(SDS和巯基乙醇)中,并进行高温加热处理,使蛋白变性,多肽链内部和肽链之间的二硫键打开,使肽链呈现开放状态。打开的肽链通过疏水作用与SDS结合,带有负电荷,在电场的作用下向正极迁移。由于不同大小的肽链在迁移过程中受到的阻力不同,它们逐渐分离...