印迹(Blotting)是将大分子(蛋白质,核酸等)从凝胶转移到固定膜的固体表面以检测已转移的分子的过程。最开做印迹的科学家叫Southern,主要研究的是DNA印迹,因此将Southern blot成为DNA印迹;随后相继发现了Northern blot (RNA 印迹)以及western blot (蛋白印迹)。Western blot是一种使用特定抗体来识别凝胶电泳分离的蛋白质...
SDSPAGE-WESTERNBLOTING Western Blotting 检测感染树突状细胞中的的病毒蛋白 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）缓冲液 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液：Tris 碱 7.55g，甘氨酸(电泳级，pH8.3) 47 g，25 ml 10% SDS(电泳级)，加 ddH2O 溶解定容至 500 ml。 12%SDS 聚丙烯酰胺（分离胶，10ml）：水 3.3 ...
免疫荧光技术SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）Westernblotting实验技术 一、免疫荧光技术 基本原理：免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记...
8)0.1% TBST缓冲液:1 mLTween-20,1000 mL TBS缓冲液; 2、SDS-PAGE胶的制备 大多数实验(小课题组)因使用上述buffer(尤其是配制SDS-PAGE的buffer)的需求相对较小,且国产公司配制的上述液体也较便宜,无需配制。笔者配制浓缩胶的配方如下,和市售或者有的实验室配制的胶的配方稍有出入,但在笔者实验室均使用的下...
SDS-PAGE电泳、westernblotting过程中常见问题以及 解决方法 SDS,PAGE电泳过程中常见问题以及解决方法几乎所有蛋白质电泳分析都在聚 丙烯酰胺凝胶上进行,而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减 少其相互间的聚集,最常用的就是SDS,PAGE电泳技术,关于大家在此过程中经 常遇到的问题进行一些讨论:Q:SDS,PA...
SDS-PAGE与Western blotting.doc,蛋白抽提与Western blotting [原理]强阳离子去污剂SDS与还原剂并用,并加热使蛋白质解离。变性的多肽与SDS结合而带负电,SDS多肽复合物在PAGE中的迁移率只与多肽的大小相关,到达饱和状态下,每克多肽约可结合1.4g去污剂。 PAGE能有效的分离
Western－blotting：SDS-PAGE和免疫印迹 Western－blotting：SDS-PAGE和免疫印迹 一：蛋白质的提取 1、取出细胞，倒去培养液，用PBS洗涤细胞一次，充分除去PBS液体，把细胞置于冰上。配置细胞裂解液，细胞裂解液用灭菌水配置，然后按照1：100比例加入PMSF混匀，然后按照细胞的多少加入裂解液于培养瓶中，在冰上放置20min...
SDS-PAGE电泳、western blotting 过程中常见问题以及解决方法 SDS,PAGE电泳过程中常见问题以及解决方法 几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行,而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集,最常用的就是SDS,PAGE电泳技术,关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论: Q:SDS,PAGE...
在分子量测定中,通过标准曲线(迁移距离与分子量对数呈线性关系)可精确计算未知蛋白的分子量。作为上游技术,SDS-PAGE常与Western blotting联用,先分离蛋白质再进行特异性抗体检测。此外,双向电泳(2D-PAGE)的第一维等电聚焦与第二维SDS-PAGE结合,可同时分离蛋白质的电荷和分子量差异,适用...
蛋白免疫印迹(Western Blotting)是将电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定蛋白的一种蛋白质检测技术。 电泳液配方 Glycine 18.80 g Tris 3.02 g SDS 1g 双蒸水 定容至1 L,提前1天配制,4℃保存转膜液配方 Glycine 2.90 g ...