采用普通的电泳仪就可以满足SDS-PAGE电泳的要求,为方便起见,也可整个SDS-PAGE电泳过程均采用恒压的方式,通常把电压设置在100V,然后设定时间为90~120分钟。设置定时可以避免经常发生的电泳过冲。通常电泳时溴酚蓝到达胶的底端处附近即可停止电泳,或根据预染蛋白质分子量标准的电泳情况,预计目的蛋白的电泳位置。( 6)...
(图2 SDS是蛋白线性化原理.SDS取代蛋白的氨基酸上的R基团,然后使得蛋白线性化,并带上负电荷且电荷和质量比是相同的,电泳时候就只会根据摩尔质量将蛋白分开。) 1.2 什么是PAGE PAGE(Polyacrylamide Gel Electrophoresis,聚丙烯酰氨凝胶电泳),如果将SDS变形蛋白质置于电场中,它们的速度不能被很好的控制并向正极移动,因...
免疫荧光技术SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）Westernblotting实验技术 一、免疫荧光技术 基本原理：免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记...
1. SDS-PAGE试剂:见聚丙烯酰胺凝胶电泳实验; 2. 匀浆缓冲液:1.0 M Tris-HCl(pH 6.8) 1.0 ml;10%SDS 6.0 ml;β-巯基乙醇 0.2 ml;ddH2O 2.8 ml; 3. 转膜缓冲液:甘氨酸 2.9 g;Tris 5.8 g;SDS 0.37 g;甲醇200 ml;加ddH2O...
蛋白免疫印迹(Western blotting 或 Immunoblotting)其基本原理是通过变形聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）将蛋白质混合物进行分离，然后将经过分离后的蛋白质样品转移到固相支撑物上，固相支撑物以非共价键形式吸附蛋白质，且可保持蛋白质的生物活性不变。以蛋白质作为抗原，利用相应的抗体对抗原进行免疫反应，后再与酶标记...
Western－blotting：SDS-PAGE和免疫印迹 Western－blotting：SDS-PAGE和免疫印迹 一：蛋白质的提取 1、取出细胞，倒去培养液，用PBS洗涤细胞一次，充分除去PBS液体，把细胞置于冰上。配置细胞裂解液，细胞裂解液用灭菌水配置，然后按照1：100比例加入PMSF混匀，然后按照细胞的多少加入裂解液于培养瓶中，在冰上放置20min...
Western blotting(蛋白质印迹)使用抗体从复杂样品中识别单个蛋白质,并进行半定量分析。首先,通过SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)将蛋白质根据大小分离。接下来,通过施加电流将蛋白质从凝胶转移到膜上。最后,根据特定的抗原-抗体结合,可以通过特异性一抗检测和分析负载了抗原的印迹膜。
WB，是Western blotting的缩写，即蛋白质印迹法，又称免疫印迹（immunoblotting）,也就通过电泳技术分离不...
Western-blotting:SDS-PAGE和免疫印迹 一:蛋白质的提取 1、取出细胞,倒去培养液,用PBS洗涤细胞一次,充分除去PBS液体,把细胞置于冰上。配置细胞裂解液,细胞裂解液用灭菌水配置,然后按照1:100比例加入PMSF混匀,然后按照细胞的多少加入裂解液于培养瓶中,在冰上放置20min。在此期间每隔3-5min摇晃培养瓶,让其充分裂解...
实验四 电泳技术-LDH-SDS-PAGE及western__ blotting 实验四 电泳技术 第一节电泳的基本原理 一、定义 •带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象，称为电泳。•带正电荷的粒子向负极移动，带负电荷的粒子向正极移动。•是生化与分子生物学的重要研究方法之一，可用于样品分离、物质纯度分析和分子...