,也称Western,Western blot、Western blotting、Western印迹,是检测蛋白的重要方法之一。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记...
(图2 SDS是蛋白线性化原理.SDS取代蛋白的氨基酸上的R基团,然后使得蛋白线性化,并带上负电荷且电荷和质量比是相同的,电泳时候就只会根据摩尔质量将蛋白分开。) 1.2 什么是PAGE PAGE(Polyacrylamide Gel Electrophoresis,聚丙烯酰氨凝胶电泳),如果将SDS变形蛋白质置于电场中,它们的速度不能被很好的控制并向正极移动,因...
免疫荧光技术SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）Westernblotting实验技术 一、免疫荧光技术 基本原理：免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记...
Western－blotting：SDS-PAGE和免疫印迹 Western－blotting：SDS-PAGE和免疫印迹 一：蛋白质的提取 1、取出细胞，倒去培养液，用PBS洗涤细胞一次，充分除去PBS液体，把细胞置于冰上。配置细胞裂解液，细胞裂解液用灭菌水配置，然后按照1：100比例加入PMSF混匀，然后按照细胞的多少加入裂解液于培养瓶中，在冰上放置20min...
蛋白质印迹法是将蛋白质混合样品经SDS-PAGE后,分离为不同条带,其中含有能与特异性抗体(或McAb)相应的待检测的蛋白质(抗原蛋白),将PAGE胶上的蛋白条带转移到NC膜上此过程称为blotting,以利于随后的检测能够的进行,随后,将NC膜与抗血清一起孵育,使第一抗体与待检的抗原决定簇结合(特异大蛋白条带),再与酶标的...
Western Blotting可用于: 1.从细胞或组织总蛋白中检测目标蛋白; 2.定量或定性确定目标蛋白表达水平; 3.蛋白-蛋白,DNA-蛋白,RNA-蛋白相互作用的检测分析。 实验原理: 蛋白研究样品通过恒定电流电泳经过PAGE胶,由于各蛋白所带分子量不同而...
Western-blotting:SDS-PAGE和免疫印迹 一:蛋白质的提取 1、取出细胞,倒去培养液,用PBS洗涤细胞一次,充分除去PBS液体,把细胞置于冰上。配置细胞裂解液,细胞裂解液用灭菌水配置,然后按照1:100比例加入PMSF混匀,然后按照细胞的多少加入裂解液于培养瓶中,在冰上放置20min。在此期间每隔3-5min摇晃培养瓶,让其充分裂解...
Western blotting(蛋白质印迹)使用抗体从复杂样品中识别单个蛋白质,并进行半定量分析。首先,通过SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)将蛋白质根据大小分离。接下来,通过施加电流将蛋白质从凝胶转移到膜上。最后,根据特定的抗原-抗体结合,可以通过特异性一抗检测和分析负载了抗原的印迹膜。
蛋白电泳 SDS-PAGE原理 SDS是一种阴离子表面活性剂,能打断蛋白质的氢键和疏水键,并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物,使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷,掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此,各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率,不再受原有电荷和分子形状的影响,而只是棒长的函数。这...