【实验】SDS-PAGE蛋白凝胶电泳的基本原理,操作方法,注意事项,制胶,上样,跑胶,观察,拍照,蛋白胶,保姆级教程, 视频播放量 60163、弹幕量 146、点赞数 1369、投硬币枚数 494、收藏人数 2927、转发人数 925, 视频作者 植物百科, 作者简介 一个实验型up,偶尔猎奇。,相
你好， SDS-PAGE跑电泳时，跑到浓缩胶和分离胶分界处时一般是要换电压的。 具体是40变60还是80变120要根据实际试验的时间来确定，而且这个时间的要求不会很严格，也就是说对电压的要求不严。 我做这个试验时，师姐给我讲的是由80变到120~140即可 ...
western blot是通过聚丙烯酰胺电泳(SDS PAGE)将蛋白质按照分子量大小分离,再转移到膜上,最后通过一抗、二抗以及显色液对蛋白进行特异性标记的方法。今天给大家分享一下实验过程中的小细节～♥️样品处理细胞样品加入裂解液后冰浴10min,用枪头搅几圈后吸出至新的EP管中。组织样本剪碎后加入裂解液冰上超声,直至...
1. SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis) SDS-PAGE,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是一种可以根据蛋白质的分子量分离样本中蛋白质的技术。 2. 原理 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N'-亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(APS),N,N,N',N’-四...
(7)加足够的电泳液后开始准备上样(电泳液至少要漫过内测的小玻璃板)。用微量进样器贴壁吸取样品,将样品吸出不要吸进气泡。将加样器针头插至加样孔中缓慢加入样品。(加样太快可使样品冲出加样孔,若有气泡也可能使样品溢出。加入下一个样品时,进样器需在外槽电泳缓冲液中洗涤3次,以免交叉污染。
A：在SDS-page不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低;而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于...
SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）SDS-PAGE 的目的是根据蛋白质的大小而不是其他物理特征来分离蛋白质。为了理解这是如何工作的，我们必须理解名称的两半：SDS 和 PAGE。SDS 由于我们试图分离许多不同形状和大小的不同蛋白质分子，我们首先希望它们变性，以便蛋白质不再具有任何二级、三级或四级结构。分子的 3D 结构将...
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，与连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。因此凝胶由上层的浓缩胶和下层的分离胶组成。上下两层胶的的区别在于Tris-HCl 的 pH 值和丙烯酰胺的浓度不同。图2：聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质分离示意图 上层的浓缩胶的pH为6.8，下层的分离胶的pH为8.8，上层为负极，下层为正极。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，与连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选Tris/HCl缓冲液，电极液选Tris/甘氨酸。电泳开始后，HCl解离成氯离子，甘氨酸...