整个操作在转移液中进行,要不断的擀去气泡。膜两边的滤纸不能相互接触,接触后会发生短路(转移液含甲醇,操作时要戴手套,实验室要开门以使空气流通)。 4、将夹子放入转移槽槽中,要使夹的黑面对槽的黑面,夹的白面对槽的红面。电转移时会产热,在槽的一边放一块冰,或将转移槽埋于冰水混合物中来降温。一般用80V...
1、SDS-PAGE电泳用到的试剂有丙烯酰胺(Acr),交联剂(Bio),过硫酸铵(APS)和四甲基乙二胺TEMED。 2、网状立体结构的凝胶,所以我们也叫垂直电泳,因为是定性检测蛋白质,也叫蛋白电泳。 二、SDS-PAGE电泳技术原理 SDS是一种阴离子型去污剂,在蛋白样品液中加入SDS和巯基乙醇后,巯基乙醇可打开二硫键,SDS能打开蛋白质...
SDS-PAGE一般采用不连续凝胶系统,即含有不同孔径的两层凝胶:上层胶(5%浓缩胶)和下层胶(分离胶),浓缩胶孔径较大,不同大小的蛋白质分子泳动速率相同,较稀的样本经过浓缩胶的迁移作用被浓缩至一个狭窄的区带,当进入小孔径的分离胶后,不同大小蛋白质由于所带电荷不同,表现出不同的迁移率,由于分子筛效应和电荷效应...
(1)清洗玻璃板 一只手扣紧玻璃板,另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲,再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。 SDS-PAGE电泳仪器 (2)灌胶与上样 玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。(操作时要使两玻璃对齐,以免漏胶)。根据蛋白分子量的不同配制不同浓度的分离胶,加入 T...
将凝固的胶板装入电泳槽内，并在电泳槽内加入SDS-PAGE电泳缓冲液，把胶浸泡一段时间，时间越长越好（防止梳子与胶相连，或胶因湿度不够而萎缩）；（6）点样时，再把梳子拔出来，拔时动作要轻，防止胶齿被拔断。二、SDS-PAGE电泳1、调胶：拔掉SDS胶上的梳子，并用小针调整齿的位置（使它们都平行）。2、点...
【实验】SDS-PAGE蛋白凝胶电泳的基本原理,操作方法,注意事项,制胶,上样,跑胶,观察,拍照,蛋白胶,保姆级教程, 视频播放量 1053、弹幕量 1、点赞数 30、投硬币枚数 6、收藏人数 50、转发人数 4, 视频作者 植物百科, 作者简介 一个实验型up,偶尔猎奇。,相关视频:【
2️⃣ 配胶操作:必须在通风橱中进行。 3️⃣ 封胶与吸水:加入水或无水乙醇后建议关闭通风,吸水或无水乙醇后,建议通风吹10分钟左右。 4️⃣ 灌胶技巧:避免胶板内出现气泡。 5️⃣ 上样过程:避免样品溢出或进入其他泳道。 6️⃣ 空泳道处理:可以加入5μL上样缓冲液,防止相邻泳道扩散至空泳道...
30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液,PH8.8;1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液,PH6.8;电泳缓冲液,PH8.3;10%SDS溶液;10%过硫酸铵溶液;样品处理液;染色液;脱色液;电泳玻璃板,电泳电源架,电泳槽,电泳仪等;蛋白Mark。 二、方法与步骤 1) 分离胶和浓缩胶配制 ...
SDS-PAGE实验标准操作流程 1. 清洗玻璃板 一只手扣紧玻璃板,另一只手蘸点洗衣粉 轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲,再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。 2. 灌胶与上样 玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。(操作时要使两玻璃对齐,以免漏胶。) ...
实验步骤 一、制备SDS-PAGE凝胶 准备分离胶和浓缩胶 按照不同的蛋白质大小,选择合适的分离胶浓度(常见为10-15%)。具体配方如下: 分离胶(Resolving Gel)配方: 水 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(Acrylamide-Bis solution) 1.5 M Tris-HCl (pH 8.8)