• 在干燥、干净的烧杯中按照配方表中的比例混合水、30%丙烯酰胺、1.5 M Tris-HCl (pH 8.8)、10% SDS、10% APS 和 TEMED。TEMED必须是最后 加入的成分。• 搅拌均匀后，立即倒入组装好的玻璃板中，确保均匀分布。• 用水或异丙醇覆盖凝胶表面，以保持均匀的表面，室温下凝固约 20-30 分钟。2. ...
(参照Cell signal Technology Protoco) 显色液(好用) 5mg DAB;200ul 1M Tris(PH=8.5,常用作纯化液母液);9.5ml水,静置5min(加入Tris缓冲液会变浑浊),加入3.5ul 双氧水,现用现配,可配好无双氧水的10X母液分装,-20℃保存,1ml/支,用时稀释到10ml并加入3.5ul双氧水即可使用。 本实验室SDS-PAGE电泳凝胶配方如下...
2、按照上面配方制SDS-PAGE凝胶,安装好电泳仪,在槽中加入电极缓冲液。 3、按一定顺序在加样孔中加入样品。 4、打开电源将电压调到80v,待样品跑过压缩胶后将电压调到120v至样品电泳到胶底部为止。 5、将凝胶小心取下放入容器中,加入染色液,用摇床摇2-3h 6、待条带清晰后倒出染色液,加入脱色液过夜 7、将脱色...
以下是制作SDS-PAGE凝胶的基本配方和制胶步骤: 配方: 1. 1%丙烯酰胺(Acrylamide)溶液:将3.7g丙烯酰胺和60μl N,N'-亚甲基双丙烯酰胺溶解在0.5ml双蒸水中,搅拌均匀。 2. 2.5%BT(Bis-Tris)溶液:将0.1g BT和0.25ml TBE(三酸乙酸盐电泳缓冲液)混合均匀。 3. 10%过硫酸铵(AMS)溶液:将10μl AMS溶解在1...
SDS连续电泳凝胶配方 注:1.缓冲液贮液可用磷酸缓冲液,咪唑缓冲液或其他缓冲液 。2.过硫酸铵应在即将灌胶前加。过硫酸铵和TEMED的量应根据室温或聚合情况而定。3.欲配制不同终浓度,不同厚度或不同大小的凝胶,可根据表中的体积按比例变化。 各种缓冲液贮液的的配方如下: ...
今天去听了导师给研究生带的高级生物化学实验课,学习了SDS-PAGE电泳的一整套操作,简单总结一下。 制板 检漏 制胶 (1) 制备10%的分离胶(梳子插进去 往下1cm,划线) (2)加1ml蒸馏水(液面压平,排气泡) (3) 制备5%的浓缩胶 样品处理 点样 电泳
电泳仪与电源 考马斯亮蓝染色液(或其他染色液) 实验步骤 一、制备SDS-PAGE凝胶 准备分离胶和浓缩胶按照不同的蛋白质大小,选择合适的分离胶浓度(常见为10-15%)。具体配方如下:分离胶(Resolving Gel)配方: 水 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(Acrylamide-Bis solution) 1.5 M Tris-HCl (pH 8.8) 10% SDS 10% ...
SDS-PAGE试剂配方SDS-PAGE电泳所用溶液: 30%聚丙烯酰胺溶液 (100 mL) 丙烯酰胺(Arc)29 g N,N’-亚甲双丙烯酰胺(Bis)1 g 用双蒸水定容至100mL,过滤备用,4℃存放 丙稀酰胺29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g,加入去离子水定容至100mL,pH值不能超过7.0,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。 5×Tris-甘氨酸缓冲液 ...