在电泳槽中加入适量的跑胶缓冲液(Running buffer),确保完全覆盖凝胶表面。 用微量移液器将样品缓慢加入到凝胶的样品孔中,避免漏入其他孔。 运行电泳 设置电泳条件:在浓缩胶阶段(约80 V)跑至样品进入分离胶,然后提高电压至120-150 V进行分离胶电泳,直到染料前沿接近凝胶底部。 电泳时间通常为1-2小时,取决于凝胶大...
将玻璃板从电泳槽中取出,并小心地取出玻璃板上的胶片。去除多余的浓缩胶,将分离胶放入塑料盒中进行染色。 7. 染色 将分离胶浸泡在考马斯亮蓝染色液中,进行染色2-4小时(在摇床上缓慢振荡),然后倒掉染色液,用自来水进行冲洗,去除凝胶和塑料盒中的染色残留物。 8. 脱色 使用脱色液进行脱色(在摇床上缓慢振荡),每...
实验用品（溶液配制说明详见文章下方）蛋白样品，SDS-PAGE loading buffer，PBS，Tris-Hcl (PH 8.8)， Tris-Hcl (PH 6.8) ，30%丙烯酰胺，10%SDS，10%过硫酸，5×SDS-PAGE电泳缓冲液，考马斯亮蓝R-250染色液，脱色液。实验步骤一、凝胶配置1．分离胶的配制（1）找出配套的胶板，用擦镜纸擦干净，并固定...
准备灌胶:将玻璃板对齐后放入夹中卡紧,然后垂直卡在架子上准备灌胶。操作前先往玻璃板间灌水,检查是否漏水。 配制分离胶:按照配胶试剂盒说明书选择合适的分离胶浓度,最后加入TEMED,摇匀后即可灌胶。配制凝胶时要充分混匀,特别是过硫酸铵要新鲜。灌胶时要掌握好速度,避免气泡产生。浓度越小的胶含水越多,凝固后...
在完成玻璃板的清洗、对齐及夹紧后，接下来需要进行的是制胶与灌胶的操作。这一步骤对于确保SDS-PAGE实验的顺利进行至关重要。SDS-PAGE电泳过程详解 在完成SDS-PAGE的制胶与灌胶后，接下来便是电泳过程。这一系列步骤对于确保实验的顺利进行至关重要。首先，是制胶环节。必须严格按照预定配方进行精确配胶，并确保...
三、电泳 注意正负极的连接,可以采用80V的电泳 观察到经过一段时间的电泳,蛋白的样品已经跑到了浓缩胶与分离胶的界面上。这个时候电压改成110V,继续电泳,直至条带跑到电泳板的底部 四:染色与脱色 凝胶放在染色液中染色,该步骤在摇匀板上完成 转到脱色液中,脱色4-6小时,或者过夜,脱色液要换3-4次 ...
5在内槽中加入电泳缓冲液,拔出样梳。将内槽置于外槽内,在外槽中也加入电泳缓冲液。 6上样,将蛋白 加到点样孔中。 7接通电源,电泳,至溴酚蓝距凝胶边缘约 0.5 ~ 25px 时,停止电泳 。 8电泳结束后,撬开玻璃板,剥胶。 9加入考马斯亮蓝染色染色液,染色。 10染色后的凝胶板用脱色液脱色,直到蛋白质条带...
本文将详细介绍SDS-PAGE凝胶电泳的步骤及相关注意事项。 一、蛋白质样品的制备 准备要分离的蛋白质样品,并将其加入样品缓冲液中,以使蛋白质溶解并保持其天然构象。样品缓冲液通常包含Tris-HCl缓冲液、甘油、SDS和β-巯基乙醇等成分,用于维持样品的pH值和还原环境,使蛋白质完全展开。 二、样品加载 将制备好的蛋白质...
SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)是一种广泛使用的蛋白质分离技术。以下是该实验的详细步骤: 一、样品准备 🧪 取样: 从待测样品中取出适量样本。 裂解: 使用裂解缓冲液将细胞或组织裂解,释放蛋白质。 变性: 加入SDS,使蛋白质变性并带上负电荷。