将凝固的胶板装入电泳槽内，并在电泳槽内加入SDS-PAGE电泳缓冲液，把胶浸泡一段时间，时间越长越好（防止梳子与胶相连，或胶因湿度不够而萎缩）；（6）点样时，再把梳子拔出来，拔时动作要轻，防止胶齿被拔断。二、SDS-PAGE电泳1、调胶：拔掉SDS胶上的梳子，并用小针调整齿的位置（使它们都平行）。2、点...
一、SDS-PAGE凝胶电泳操作流程 1. 准备电泳缓冲液:包括浓缩胶和分离胶的两个缓冲系统,分别为Tris-HCl和Tris-甘氨酸。 2. 配置凝胶:使用适当的浓度和厚度,并根据需要进行固定。 3. 上样:将待测样本添加到凝胶上样孔中,并确保样本与凝胶充分混合。 4. 电泳:通过恒定电压进行电泳,直至完成所需时间。 5. 染色:...
SDS-PAGE电泳上样 3、电泳 加样完毕,盖好上盖,连接电泳仪,打开电泳仪开关后,设置好电压。待样品跑至浓缩胶后再调高电压直至溴酚蓝指示剂迁移到距前沿1～2cm 处即停止电泳。 4、染色、脱色 电泳结束后,关掉电源,取出玻璃板,将胶面与一块玻璃板分开后放入大培养皿中染色,使用 0.25%的考马斯亮蓝染液,染色 2...
SDS-PAGE凝胶电泳操作蛋白含量较低的酶制剂或原料样品1粉剂或颗粒样品称取样品1g加入35ml蒸馏水进行搅拌溶解1h搅拌时间可根据实际情况进行增减4000rpm离心10min取离心上清液等体积加入20的三氯乙酸聚沉30min离心弃去离心上清液用70的丙酮溶液洗涤沉淀4000rpm离心10min重复洗涤35次将丙酮洗涤液吹干加入适量13mlpbs溶解沉淀...
(1)玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶(操作时要使两玻璃对齐,以免漏胶)。 垂直电泳槽 (2) 按前面方法配10%分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时,可用10ml枪吸取5ml胶沿玻璃放出,待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加一层水,液封后的胶凝的更快。(灌胶时开始可快一些,...
【实验】生物离心机的原理,操作,使用方法,注意事项,角转子,水平转子 17:35 【实验】分光光度计的原理,使用方法,操作步骤 14:06 【实验】荧光显微镜的原理、操作、使用方法、注意事项 14:12 【实验】DNA琼脂糖凝胶电泳的基本原理,操作方法,注意事项,制胶,上样,跑胶,观察,拍照,DNA胶,RNA胶,保姆级教程 17:54 ...
电泳装置 电泳仪与电源 考马斯亮蓝染色液(或其他染色液) 实验步骤 一、制备SDS-PAGE凝胶 准备分离胶和浓缩胶 按照不同的蛋白质大小,选择合适的分离胶浓度(常见为10-15%)。具体配方如下: 分离胶(Resolving Gel)配方: 水 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(Acrylamide-Bis solution) ...
6️⃣ 胶条保养:电泳结束后,将胶条置于实验台上自然晾干。若胶条老化或出现裂纹,可加保鲜膜保护,延缓老化并防止胶液泄漏。7️⃣ 保存与使用:胶液最好现配现用。若需保存,请用湿润的保鲜膜包好,并置于4℃冰箱中。遵循这些步骤,你的SDS-PAGE电泳实验将更加精准、高效!💪...
1、垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质一、实验目的学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDSPAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。二、实验原理蛋白质是两性电解质,在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时,蛋白质本身带负电,在电场中将向正极移动;当溶液的pH小于蛋白质的等电点时...
操作步骤: 采用垂直式电泳槽装置 1、 安装电泳槽 2、 配制分离胶(12%)(10ml): 将分离胶上的水倒去,并用滤纸吸干多余水份,加入上述混合液,立即将梳子插入玻璃板间,完全聚合需15-30min。 4、待积层胶完全聚合后,小心拔出梳子,然后将玻璃板固定在电泳槽上。