首先将AAV-EF1α-DIO-GFP-TVA与AAV-EF1α-DIO-RVG按照特定比例混合,然后向在特异神经元中表达Cre的转基因小鼠目标脑区立体定位注射AAV混合病毒。待AAV病毒充分表达两周以上,即可在同一区域立体定位注射RV-EnvA-ΔG-dsRed,RV注射后一周,可对动物心脏灌注,利用4% PFA固定后取出脑组织制备样本观察标记结果。 注...
答:为保证RV-EnvA-△G-DsRed注射时已有高丰度表达的TVA介导其感染神经元及G蛋白补偿其跨突触能力,AAV注射后需表达两周或三周,然后在同一区域注射RV-EnvA-△G-dsRed;RV注射后一般以10天为标准时间牺牲动物,而此时间也可控制在7-12天(所有实验样本都需保证采用一致的时间窗口)。 ◎ AAV helper使用比例? 答...
进一步地，作为对PARTS系统范式的验证，通过尾静脉给药将AAV-PHP.eB-TVA递送至全脑，VTA脑区注射RV-EnvA-ΔG-DsRed，VTA的多个上游脑区均可见DsRed报告蛋白表达，包括大脑皮层（CTX）、外侧缰核（LHb）、下丘脑外侧区（LHA）、未定带（ZI）、中脑网状核（MRN）和小脑核（CBN）等。使用PARTS方法追踪VTA的广谱上...
注射RV-EnvA-△G-DsRed后，需等待两周或三周以确保高丰度表达的TVA介导病毒感染神经元及G蛋白补偿其跨突触能力。RV注射后一般以10天为标准时间牺牲动物，但时间可控制在7-12天，所有实验样本需采用一致的时间窗口。在使用AAV helper时，推荐的病毒体积混合比例约为1：1或1：2。病毒可以适当稀释，使...
使用的病毒:RV-EnvA-GFP,AAV-DIO-TVA-hBFP和AAV-DIO-RG 实验方法和结果:在抑制性神经元(SST, PV, VIP)的Cre小鼠mPFC脑区注射RV-EnvA-GFP以及Cre依赖的辅助病毒AAV-DIO-TVA-hBFP和AAV-DIO-RG实现逆向跨单级突触,同时在ACB脑区注射从轴突末梢吸收的RV-DG-DsRed,病毒逆向标记海马体投射到ACB区的神经元,最...
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狂犬病毒（Rabies Virus，RV）属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病毒属（Lyssavirus），其基因组是长约12 kb的单股负链RNA，由N、P、M、G和L共5个结构基因排列，分别编码核蛋白、磷蛋白、基质蛋白、糖蛋白和转录酶大蛋白。在宿主体内，病毒糖蛋白G介导病毒粒子与细胞表面受体结合，通过内吞作用进入...
2. 在前下丘脑核(AHN)注射AAV-helper和RV观察腹侧海马下托(vSub)的逆行标记情况。 研究人员为确定驱动AHNVgat+神经元活动及回避行为(引发焦虑场景中)的突触输入,利用狂犬病毒追踪策略,将表达TVA-GFP、RVG的AAVs混合物注射到Vgat-IRES-Cre雄性小鼠AHN中,三周后,同一位点注射RV-EnvA-△G-dsRed,结果显示,AHN...
进一步地,作为对PARTS系统范式的验证,通过尾静脉给药将AAV-PHP.eB-TVA递送至全脑,VTA脑区注射RV-EnvA-ΔG-DsRed,VTA的多个上游脑区均可见DsRed报告蛋白表达,包括大脑皮层(CTX)、外侧缰核(LHb)、下丘脑外侧区(LHA)、未定带(ZI)、中脑网状核(MRN)和小脑核(CBN)等。 使用PARTS方法追踪VTA的广谱上游输入网络 ...
RV-CVS-EnvA-ΔG与第一代逆向跨单突触系统比较，它具有更低的神经毒性以及更强的跨突触突触传递能力...