首先将AAV-EF1α-DIO-GFP-TVA与AAV-EF1α-DIO-RVG按照特定比例混合,然后向在特异神经元中表达Cre的转基因小鼠目标脑区立体定位注射AAV混合病毒。待AAV病毒充分表达两周以上,即可在同一区域立体定位注射RV-EnvA-ΔG-dsRed,RV注射后一周,可对动物心脏灌注,利用4% PFA固定后取出脑组织制备样本观察标记结果。 注...
研究人员为确定驱动AHNVgat+神经元活动及回避行为(引发焦虑场景中)的突触输入,利用狂犬病毒追踪策略,将表达TVA-GFP、RVG的AAVs混合物注射到Vgat-IRES-Cre雄性小鼠AHN中,三周后,同一位点注射RV-EnvA-△G-dsRed,结果显示,AHN中有很多GFP+/dsRed+“起始”细胞,逆行标记dsRed+细胞在上游脑区vSub观察到。 图3. ...
使用的病毒:RV-EnvA-GFP,AAV-DIO-TVA-hBFP和AAV-DIO-RG 实验方法和结果:在抑制性神经元(SST, PV, VIP)的Cre小鼠mPFC脑区注射RV-EnvA-GFP以及Cre依赖的辅助病毒AAV-DIO-TVA-hBFP和AAV-DIO-RG实现逆向跨单级突触,同时在ACB脑区注射从轴突末梢吸收的RV-DG-DsRed,病毒逆向标记海马体投射到ACB区的神经元,最...
注射RV-EnvA-△G-DsRed后，需等待两周或三周以确保高丰度表达的TVA介导病毒感染神经元及G蛋白补偿其跨突触能力。RV注射后一般以10天为标准时间牺牲动物，但时间可控制在7-12天，所有实验样本需采用一致的时间窗口。在使用AAV helper时，推荐的病毒体积混合比例约为1：1或1：2。病毒可以适当稀释，使...
利用Cre转基因鼠结合Cre-LoxP控制表达TVA及G蛋白的AAV辅助病毒,可实现只在特定区域特异类型神经元中表达TVA及G蛋白,从而利用RV-EnvA-ΔG实现对特异类型神经元的逆向跨单级突触标记 图1. A:跨单级RV改造原理;B:RV逆行跨单级突触标记示意图(ArenkielBR, et al., Nature.2009.)...
答:为保证RV-EnvA-△G-DsRed注射时已有高丰度表达的TVA介导其感染神经元及G蛋白补偿其跨突触能力,AAV注射后需表达两周或三周,然后在同一区域注射RV-EnvA-△G-dsRed;RV注射后一般以10天为标准时间牺牲动物,而此时间也可控制在7-12天(所有实验样本都需保证采用一致的时间窗口)。 ◎ AAV helper使用比例? 答...
同时在ACB脑区注射从轴突末梢吸收的RV-DG-DsRed，病毒逆向标记海马体投射到ACB区的神经元，最终找到...