若不配制 Master Mix,向步骤 1 的反应液中添加试剂时,要先加入 RNase Free dH2O 和5×PrimeScript Buffer 2 (for Real Time)混合均匀,以使 gDNA Eraser 的活性充分受到抑制, 再添加 RT Primer Mix、PrimeScript RT Enzyme Mix I,轻轻混匀进行反转录反应。 使用RT Primer Mix 可以高效合成 cDNA。因为实验目的...
步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,最大速离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待用或-18℃保存。 步骤2. 每个反应体系为20µl,其中反应mix为15µl。 (1)依据本次试验样本数,制备RT-qPCR的反应mix。 1个反应mix需要: ①ConviFlex...
(RT-qPCR 分一步法 RT-qPCR 和两步法 RT-qPCR 两种)。 (4) 产物分析:通过琼脂糖凝胶电泳(RT-PCR)或荧光信号(RT-qPCR)分析扩增效果。 此外,一种将 RT-PCR 与 qPCR 相结合的技术,逆转录定量实时 PCR(Reverse transcription quantitative real-time PCR, RT-qPCR)。通过在 qPCR 反应中使用 cDNA 来测量 RNA...
RT-qPCR原理的三个主要步骤: 1、反转录: 1.1、使用逆转录酶和特定引物将RNA样品反转录成cDNA。 1.2、该步骤将RNA模板转化为更稳定且可扩增的DNA形式。 1.3、反转录过程中使用特定引物。 2、PCR扩增: 2.1、使用特定引物对cDNA进行PCR扩增,这些引物环绕目标区域。
步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,最大速离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待用或-18℃保存。 步骤2. 每个反应体系为20µl,其中反应mix为15µl。 (1)依据本次试验样本数,制备RT-qPCR的反应mix。
步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待用或-18℃保存。 步骤2. 每个反应体系为20µl,其中反应mix为15µl。 (1)依据本次试验样本数,制备RT-qPCR的反应mix。 1个反应mix需要: ①ConviFlex™ RT-...
步骤1.冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待用或-18℃保存。 步骤2.每个反应体系为20µl,其中反应mix为15µl。 (1)依据本次试验样本数,制备RT-qPCR的反应mix。
步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,**速离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待用或-18℃保存。 步骤2. 每个反应体系为20µl,其中反应mix为15µl。 (1)依据本次试验样本数,制备RT-qPCR的反应mix。
操作步骤 1、从RNA（或mRNA）反转录合成cDNA第一链：2、于95℃加热5～10min，灭活反转录酶，使RNA—cDNA杂交体变性，然后迅速冰浴冷却：3、PCR扩增：方法基本同PCR。cDNA第一链合成方法：20ul反应液中含10xPCR扩增缓冲液，2ul；四种dNTP（10 mmol/L）2ul；RNA酶抑制剂20U；mRNA，l～2ug（或RNA 5-10ug...