RT-QPCR 是 Q-PCR 的一种,应用广泛,包括: 扩增特异性分析 基因定量分析 基因分型 SNP 分析 常用方法: SYBR Green I 非特异性方法 Taqman 水解探针特异性方法 二、SYBR Green I 非特异性方法 SYBR Green I 染料 与双链 DNA 结合,荧光信号强度与双链 DNA数量相关。 实验前准备 试剂与耗材: 特异性 PCR 引...
Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合,其中的“RT”是Reverse transcription(逆转录)的意思,所以RT-qPCR就是结合了荧光定量技术的逆转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析。因为RT-PCR只可以定性,但不能进行定量分析。与RT-PCR一样,RT-qPCR定量分析R...
RT-qPCR可通过一步法或两步法来完成。一步法RT-qPCR把逆转录与PCR扩增结合在一起,使逆转录酶与DNA聚合酶在同一管内同样缓冲液条件下完成反应。一步法RT-qPCR只需要利用序列特异性引物。在两步法RT-qPCR中,逆转录和PCR扩增过程是在两个管中完成,使用不同的优化的缓冲液、反应条件、以及引物设计策略。 RT-qPCR...
RT—PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异性引物中的一种...
来自德国MB公司的RNA病毒检测试剂盒(RT-qPCR法)(英文名:ConviFlex™RT-Taq mix)用于定性检测和分析RNA病毒和RNA分子,特别适合检测新冠病毒等此类病毒。缔一生物作为MB公司国内总代理,为大家介绍RNA病毒检测(RT-qPCR法)试剂的操作步骤。 步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,离心5秒钟,然后加入260μl复溶...
分子克隆可以说是研究分子生物的必备技能，在学习分子克隆的过程中，想必各位小伙伴都会接触到PCR、RT-PCR和qPCR这几个词，这三者具体有什么区别呢？本期小编将从定义和技术原理来介绍这三种技术。首先来讲讲极大地推进了生命科学研究进程的聚合酶链反应，也就是PCR（polymerase chainreaction）技术，这是一种使用DNA...
探针是荧光标记的，5'端有荧光标签（F），3'端有荧光淬灭标签（Q）。聚合酶在延伸引物时，遇到探针后开始降解，释放出荧光。整个过程通过荧光仪检测，荧光强度随每轮扩增增加，代表复制DNA链的数量。本期内容介绍了PCR、RT-PCR和qPCR的技术原理，下期将详细讲解PCR技术的实验步骤和注意事项，感兴趣的...
RT SuperMix for qPCR (with gDNA wiper)是基于Reverse Transcriptase(货号K1071)的逆转录反应预混液。Reverse Transcriptase是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上经过基因工程改造后获得的全新逆转录酶,相较而言Reverse Transcriptase降低了RNase H活性且大幅度提高了热稳定性。Reverse Transcriptase可耐受更...