1、针对特定序列设计的反转录引物 2、miRNA(茎环法)的反转录,需要根据基因序列设计对应的引物 【注】:为提高反转录效率,并保障获得更加完整的cDNA,建议将Oligo(dT)和随机引物混合使用。 PART 04 精品推荐 为方便大家对逆转录引物的选择,翌圣生物通过基因工程技术开发出Hifair®III系列逆转录试剂盒,包括两种引物形式...
引物设计 用于RT-qPCR 中 qPCR 步骤的 PCR 引物最好应设计成跨越一个外显子-外显子连接,其中一条扩增引物可以潜在地跨越实际外显子-内含子边界(图4)。由于含内含子的基因组 DNA 序列不会被扩增,因此这种设计可以减少从污染的基因组DNA中扩增得到的假阳性的风险。
qPCR引物设计的好坏,直接关乎着扩增效率高低,产物特异性与否。所以正确设计出好的引物是qPCR成功的第一步。引物设计在满足常规引物设计的原则上还要注意以下原则: 1、目的片段长度控制在100 ~ 300 bp; 2、跨外显子设计,避免基因组DNA的影响; 3、设计的引物需要进行扩增效率的检测,扩增效率达标(90-110%)才可用于...
好了,下面我们就可以来设置引物参数了! 点击Primer Parameters,设置引物的退火温度(当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。它足够低可以保证引物同目的序列有效退火;但同时还要足够高,以减少非特异性结合。一般低于引物的Tm值5度左右) 小编我一般...
(1)设计具有高熔解温度(Tm)的引物; (2)进行BLAST搜索,确保引物不与数据库中的其他序列匹配; (3)避免包含重复序列、多聚G/C序列和3'末端的自由能高的序列。 2. 长度 RT-qPCR引物的长度应在18-24个核苷酸之间。引物过短可能不够特异,而过长可能无法有效地结合到目标序列上。
载基采用SYBR荧光染料法进行荧光定量PCR检测,从引物设计到检测一次性完成,提供2种常用的内参引物及免费的专业数据分析,每个样品设置至少三个平行对照,保证结果的准确可靠。 实验流程: 实验步骤: RNA提取 1) 细胞样本中加入0.5 mL NucleoZol,吹打混匀,静置3 min。
引物的选择 通常rt primer可分为三类:oligo dt,随机引物和基因特异性引物。根据不同的实验需求选择适合的引物进行使用。 ² 如果模板为真核生物来源,且后期cdna用于常规pcr扩增,建议选择oligo(dt);若后续实验仅用于qpcr,建议将oligo(dt)与随机引物混合后使用,可提高反转录效率。
1、引物应用核酸系列保守区设计并具有特异性。最好位于编码区5'端的300-400bp区域内,可以用DNAMAN,primer5软件看看结果。 2、引物长度一般在17-25bp之间,上下游引物不能相差太大。 3、G+C含量在40-60%之间,45-55%最佳。 4、碱基要随机分布,尽量均匀。
逆转录引物的选择 RNA类型: 1、真核生物mRNA 2、miRNA、核糖体RNA和tRNA等小RNA前体加A尾处理后的模板 引物选择: Oligo(dT) 原因: 1、真核生物mRNA含有poly(A)尾,可以Oligo(dT)引物结合 2、miRNA、rRNA和tRNA本身无A尾,故需要人工处理后才能与Oligo(dT)引物结合 ...
1、引物应用核酸系列保守区设计并具有特异性。最好位于编码区5'端的300-400bp区域内,可以用DNAMAN,primer5软件看看结果。 2、引物长度一般在17-25bp之间,上下游引物不能相差太大。 3、G+C含量在40-60%之间,45-55%最佳。 4、碱基要随机分布,尽量均匀。