RT-qPCR包括三大步骤:RNA的提取与质量检测、逆转录成cDNA、以及实时荧光定量PCR实验。通过RT-qPCR实验,可以合成cDNA探针、获取目的基因、以及分析基因的转录水平。 RNA的提取与质量检测 从细胞、组织等样本中提取出RNA后,需要对提取的RNA的纯度、浓度、以及完整性进行评估,质检达标后才能进行后续的实验。一般需要通过紫外...
目前检测SARS-Cov-2病毒RNA最有效的方法是实时荧光RT-PCR(RT-qPCR)该方法检测一个样品需要超过60分钟。图1为以cDNA为模板进行实时荧光PCR的示意图。请回答下列问题:(1)RT时,需从样本中提取病毒RNA,经 逆转录酶作用生成cDNA。(2)PCR时,需加入荧光染料(如图1中的SYBRGreenⅠ)。进行阶段2时,引物与cDNA按照 碱基...
RT-qPCR的性能受RNA完整性的影响,而PCR的效率一般不受影响。测定后RIN值大于5的总RNA被认为是质量良好,RIN值大于8的被认为是完整的总RNA。不同生物体和特定样本类型有特定RIN值要求和阈值水平。作为一种方便和客观的评估RNA数量和完整性的方法,该方法与MIQE指南理念完全一致,因此经常被推荐用于总RNA质量控制。 3....
RNA病毒检测试剂盒(RT-qPCR法)(英文名:ConviFlex™RT-Taq mix)用于定性检测和分析RNA病毒和RNA分子,特别适合检测新冠病毒等此类病毒。 步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,最大速离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待用或-18℃保存。步骤...
RNA病毒检测试剂盒(RT-qPCR法)(英文名:ConviFlex™RT-Taq mix)用于定性检测和分析RNA病毒和RNA分子,特别适合检测新冠病毒等此类病毒。本文缔一生物为您介绍。 步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,**速离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待...
qPCR预混液试剂整合了 Real Time RT-PCR 的反转录酶(MMLV Reverse Transciptase ) 和抗体修饰的热启动酶 ( Hotstart Taq DNA Polymerase),配合经过优化的缓冲体系,使用基因特异性引物(GSP)在单管中完成逆转录和 qPCR 反应,不需要额外的开管/移液操作,不需要额外的操作,操作简单,降低污染风险,同时提高了检测灵敏...
qPCR预混液试剂整合了 Real Time RT-PCR 的反转录酶(MMLV Reverse Transciptase ) 和抗体修饰的热启动酶 ( Hotstart Taq DNA Polymerase),配合经过优化的缓冲体系,使用基因特异性引物(GSP)在单管中完成逆转录和 qPCR 反应,不需要额外的开管/移液操作,不需要额外的操作,操作简单,降低污染风险,同时提高了检测灵敏...
关于HBV RNA定量检测技术,目前使用最多的主要包括反转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和RNA捕获探针法。 RT-qPCR检测技术 该技术通常采用普通磁珠法提取血清样本或者血浆样本中的总核酸(包含HBV RNA和HBV DNA),经DNA酶消化去除HBV DNA的干扰,以获得HBV RNA。HBV RNA经逆转录后作为PCR扩增检测模板,利用针对HBV RNA序...
RNA病毒检测(RT-qPCR法)试剂的操作步骤 步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,最大速离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待用或-18℃保存。 步骤2. 每个反应体系为20µl,其中反应mix为15µl。