通常使用RT-PCR技术体外扩增病毒的RNA的两个片段,其中一个是编码核衣壳(N蛋白)的基因,另外一个编码S蛋白/M蛋白/E蛋白/1ab蛋白的基因。 虽然RT-PCR是世界各国公认检测病毒的金标准,但是,由于其准确率约为70%、耗时较长(4~6小时),且需要完备的、精密的实验室设备和操作熟练的技术员,导致该技术在落后的地区或者...
临床医学中的许多常见检测手段，都源自于生物学研究。我们常见的病毒检测，就利用了RT-PCR技术。德国Minerva Biolabs的RT-PCR引物/探针（英文名：SARS-CoV-2 Confirm），用于定性检测和分析新冠病毒RNA。它仅用于研究，不用于临床诊断。RT-PCR（逆转录聚合酶链反应，Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）是一...
选取新型冠状病毒 ORF和N基因,以及甲、乙型流感病毒M基因的核苷酸保守区域,设计和筛选出多重巢式荧光PCR引物和探针组合,同时引入人源基因内标的巢式扩增引物和探针,建立一套多重巢式荧光RT-PCR检测方法,应用制备的假病毒阳性质控品和样本...
核酸检测主要是通过实时荧光定量PCR检测新冠病毒保守的片段区域的序列,以确定体内是否含有该病毒。当定量PCR检测出有该序列,说明有可能感染了病毒,会通过多次PCR进行检测并结合临床检测指标进行确诊。 实时荧光定量PCR使用Taqman法进行检测,使用针对病毒2个或更多的保守区域特异性引物和探针(不同国家或地区检测的区域不一致...
国家卫健委最新发布的《新型冠状病毒感染肺炎诊疗方案(试行第五版)》中提出荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性或病毒基因测序与已知的新型冠状病毒高度同源为确诊病例的病原学证据之一。实时荧光PCR作为成熟可靠的技术,同时因操作相对简便,检测速度快成为当前新...
聚合酶链反应是用于检测引起埃博拉、非洲猪瘟和口蹄疫等疾病的病原体(包括病毒)的最广泛使用的诊断检测方法之一。由于新冠肺炎病毒只含有核糖核酸,所以采用实时或常规的逆转录-聚合酶链反应进行检测。 20多年来,原子能机构与粮农组织合作,特别是通过其兽医诊断实验室网,为来自世界各地的专家使用实时逆转录—聚合酶链反...
【关键词】定量RT-PCR,病毒感染,病毒定量,控制感染,检测方法 一、 前言 病毒感染是世界性难题,由病毒引起的肺炎会导致相互感染并造成大量死亡。而其中病毒定量是控制感染的一个重要因素。定量RT-PCR检测具有广泛范围、高灵敏度和准确性等优点,使其具有广泛应用基础。 二、 发展历史 (一) 早期的PCR 早期研发PCR最...
1.5 禽流感病毒H5、H7、H9亚型多重荧光RT-PCR检测方法的建立 通过单重荧光RT-PCR方法对设计的引物探针进行筛选,筛选出可准确扩增相应亚型靶标且不能扩增其他亚型的引探组合,再将单重扩增筛选的引探相互配对,筛选出能够同时检测禽流感病毒H5、H7、H9三个亚型且对Ct值和扩增效率影响不大的三组引探,采用矩阵法摸索...
RT-PCR检测方法的具体步骤如下：（一）RNA提取 1、根据标本数量分装RLT液：从Kit中取出RLT液，用1.5mL离心管分装，每管500μL（在体系配制区操作）。2、在生物安全柜内将采样液（鼻拭子、咽拭子、胸水等）或病毒培养物（鸡胚尿囊液或细胞培养液）取100μL加入RLT液管中，充分混匀。 3、每...