为了在SuperScriptⅡ逆转录反应中最大限度提高RT-PCR的灵敏度,可以加入10%的甘油并在45℃保温。如果1/10的逆转录反应产物加入到PCR中,那甘油在扩增反应中的浓度为0.4%,这不足以抑制PCR。 5. RNaseH处理: 在PCR之前使用RNaseH处理cDNA合成反应可以提高灵敏度。对于某些模板,据认为cDNA合成反应中的RNA会阻止扩增...
在使用SuperScriptⅡ的逆转录反应中加入乙酰化BSA可以增加灵敏度,而且对于小量RNA,减少SuperScriptⅡ的量并加40单位的RnaseOut核酸酶抑制剂可以提高检测的水平。如果在RNA分离过程中使用了糖元,仍然建议在使用SuperScriptⅡ进行逆转录反应时加入BSA或RNase抑制剂。 7、减少基因组DNA污染 RT-PCR所遇到的一个潜在的困难是R...
在使用SuperScriptⅡ的逆转录反应中加入乙酰化BSA可以增加灵敏度,而且对于小量RNA,减少SuperScriptⅡ的量并加40单位的RnaseOut核酸酶抑制剂可以提高检测的水平。如果在RNA分离过程中使用了糖元,仍然建议在使用SuperScriptⅡ进行逆转录反应时加入BSA或RNase抑制剂。 7、减少基因组DNA污染 ...
在配置RT-qPCR的反应体系时需要注意什么?拒绝踩坑!#PCR#反应体系, 视频播放量 541、弹幕量 0、点赞数 12、投硬币枚数 0、收藏人数 28、转发人数 0, 视频作者 细胞之邦, 作者简介 不定期更新细胞、分子、免疫学实验知识视频,让你实验操作不迷路,早日发paper,不延毕!,
第第页提高RT-PCR反应体系的灵敏度方式解读RT-PCR(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction),也称为逆转录PCR,是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。提高RT-PCR反应体系的灵敏度几个方法:1、分离高质量RNA成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA应保-证全长并且不含逆转录酶的...
建议每20μl反应体系使用0.5μg oligo(dT)。oligo(dT)12-18适用于多数RT-PCR。ThermoScript RT-PCR System提供了oligo(dT)20,因为其热稳定性较好,适用于较高的保温温度。 基因特异性引物(GSP)对于逆转录步骤是特异性最好的引物。GSP是反义寡聚核苷,可以特异性地同RNA目的序列杂交,而不象随机引物或oligo(dT)...
建议每20μl反应体系使用0.5μg oligo(dT)。oligo(dT)12-18适用于多数RT-PCR。ThermoScript RT-PCR System提供了oligo(dT)20,因为其热稳定性较好,适用于较高的保温温度。 基因特异性引物(GSP)对于逆转录步骤是特异性最好的引物。GSP是反义寡聚核苷,可以特异性地同RNA目的序列杂交,而不象随机引物或oligo(dT)...
解析 由题干信息“RTPCR是将RNA的逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式反应(PCR)相结合的技术”可知,RTPCR会以RNA为模板,合成DNA,故该体系应含有逆转录酶,A正确;该体系是通过控制温度使反应在体外反复进行的,反应体系中无须加入ATP,B错误;PCR技术中,当温度超过到90 ℃时,双链DNA解聚为单链,当温度下降到50...
RT-PCR的反应体系(1)一:25UL 体系的量如下:无RNA酶水 ?5*buffer 5.0ULDNTP Mix 1.0ULEnzyme Mix 1.0ULprimer A ?(0.6M)Primer B ?(0.6M)RNA模板 ?(不大于1UL)Q (RNA酶抑制剂) 可加可不加二:虽说有几个试剂未知其量,但都是需
等PCR所必须的东西，所以必须有反应体系，引物有可能形成二聚体，在PCR 过程中即可看到，一般位于MARKER最小带的上面（也就是说很小，是指引物之间互相配对儿），管家反应体系我不懂了……DNA模板梯度的设置时为了选取DNA模板最合适的浓度，浓度过低可能得不到结果，浓度过高则特异性不强，杂带会多 ...