解:A、由题干信息“RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的多聚酶链式反应(PCR)相结合的技术”分析可知,RT-PCR以RNA为模板来合成DNA,故该体系应含有反转录酶,A正确; B、该体系是通过控制温度使反应在体外反复进行,不需要ATP提供能量,无需加入ATP,B错误; C、PCR操作中,当温度上升到90℃以上时,双链DNA解旋为...
在使用SuperScriptⅡ的逆转录反应中加入乙酰化BSA可以增加灵敏度,而且对于小量RNA,减少SuperScriptⅡ的量并加40单位的RnaseOut核酸酶抑制剂可以提高检测的水平。如果在RNA分离过程中使用了糖元,仍然建议在使用SuperScriptⅡ进行逆转录反应时加入BSA或RNase抑制剂。 7、减少基因组DNA污染 RT-PCR所遇到的一个潜在的困难是R...
为了在SuperScriptⅡ逆转录反应中最大限度提高RT-PCR的灵敏度,可以加入10%的甘油并在45℃保温。如果1/10的逆转录反应产物加入到PCR中,那甘油在扩增反应中的浓度为0.4%,这不足以抑制PCR。 5. RNaseH处理: 在PCR之前使用RNaseH处理cDNA合成反应可以提高灵敏度。对于某些模板,据认为cDNA合成反应中的RNA会阻止扩增产物...
在使用SuperScriptⅡ的逆转录反应中加入乙酰化BSA可以增加灵敏度,而且对于小量RNA,减少SuperScriptⅡ的量并加40单位的RnaseOut核酸酶抑制剂可以提高检测的水平。如果在RNA分离过程中使用了糖元,仍然建议在使用SuperScriptⅡ进行逆转录反应时加入BSA或RNase抑制剂。 7、减少基因组DNA污染 ...
在配置RT-qPCR的反应体系时需要注意什么?拒绝踩坑!#PCR#反应体系, 视频播放量 541、弹幕量 0、点赞数 12、投硬币枚数 0、收藏人数 28、转发人数 0, 视频作者 细胞之邦, 作者简介 不定期更新细胞、分子、免疫学实验知识视频,让你实验操作不迷路,早日发paper,不延毕!,
因为其较高的特异性,oligo(dT)一般不需要对RNA和引物的比例及poly(A)+选择进行优化。建议每20μl反应体系使用0.5μg oligo(dT)。oligo(dT)12-18适用于多数RT-PCR。Thermo RT-PCR System提供了oligo(dT)20,因为其热稳定性较好,适用于较高的保温温度。
第第页提高RT-PCR反应体系的灵敏度方式解读RT-PCR(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction),也称为逆转录PCR,是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。提高RT-PCR反应体系的灵敏度几个方法:1、分离高质量RNA成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA应保-证全长并且不含逆转录酶的...
RT-PCR的反应体系(1)一:25UL 体系的量如下:无RNA酶水 ?5*buffer 5.0ULDNTP Mix 1.0ULEnzyme Mix 1.0ULprimer A ?(0.6M)Primer B ?(0.6M)RNA模板 ?(不大于1UL)Q (RNA酶抑制剂) 可加可不加二:虽说有几个试剂未知其量,但都是需
Rt-PCR实验步骤和反应体系优化trizol法抽提总rna细胞1107组织100mg加1mltrizol细胞用1ml加样器吹至液体澄清且无细胞团块组织匀浆量100mg时分装1ml每ep颠倒混匀10下室温5分钟加氯仿15体积02ml必须按总体积的15颠倒混匀10下室温5分钟4离心12000g15分钟加等体积异丙醇约400l混匀室温10分钟4离心12000g10分钟加冰预...
建议每20μl反应体系使用0.5μg oligo(dT)。oligo(dT)12-18适用于多数RT-PCR。ThermoScript RT-PCR System提供了oligo(dT)20,因为其热稳定性较好,适用于较高的保温温度。 基因特异性引物(GSP)对于逆转录步骤是特异性最好的引物。GSP是反义寡聚核苷,可以特异性地同RNA目的序列杂交,而不象随机引物或oligo(dT)...