在溶解曲线中出现双峰有三种可能：1、引物峰，引物峰通常是两峰中的前面一个，消除的办法是降低体系中的引物量或重新设计引物；2、在做基因表达差异时容易出现DNA被扩增峰（只在引物跨内含子时存在），出现原因是提取RNA时存在DNA污染，可以通过电泳验证，这时要重新消化RNA样品中的DNA；3、扩增非特异，这时要重新摸...
溶解曲线的意思是：当温度高于扩增产物的TM值时，双链产物变单链，荧光值因为这样的变化而产生变化，根据这一原理，你推算你的体系是是否会在温度变化时产生荧光值的变化，比如你用的是TAQMAN探针，taqman探针产生荧光变化的原理是探针被外切酶活性的TAQ酶剪切断而产生的，那么在只有温度变化的情况下，是没...
Rt PCR溶解曲线中出现双峰原因有什么 2023年11月17日 在溶解曲线中出现双峰有三种可能: 1、引物峰,引物峰通常是两峰中的前面一个,消除的办法是降低体系中的引物量或重新设计引物; 2、在做基因表达差异时容易出现DNA被扩增峰(只在引物跨内含子时存在),出现原因是提取RN...
你还是先用普通PCR扩试一下 看看能否扩的出来 退火是否合适 有没有二聚体 这样盲目的做 荧光...
你设置溶解曲线那一步骤了吗?要是没设,当然不会起峰。可能由于你的引物根本没有把目的片段PCR出来,自然也就没有峰。
本人刚接触RT-PCR，现在目的基因每次P出来Tm值都完全一致，但是actin每次都只有两三个的Tm值在一个位置...
除了溶解曲线，还要看扩增曲线，加样手法，等等影响因素，综合考虑。就算都没有问题，实验结果不一定就会...
不知道你现在还可不可以看到这个问题了，我现在在做定量出现了类似情况，就是标曲和样品的融解曲线Tm值...
终极方法是将您样品的条带测序，看看是否是您需要检测的基因，如果是，就算熔解曲线大小不同也无所谓的...
我的情况跟你一样，找不到污染的原因，什么都换了新的，后来换了新的荧光定量试剂盒就好了 ...