RT-PCR操作步骤 RT-PCR步骤 一、总RNA提取 1. 取200mg组织，放到1.5mlEP管中，加入1mlTrizol剪碎。2. 震荡30s。3. 加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。4. 12000×g，4℃离心，15min。5. 吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。6. 加等体积异丙醇，-20℃，30min。7. 12000×g，4℃离心...
RT-PCR操作步骤按照顺序加入pcrststrandcdna以下配好后一起加入24微升10pcrbuffer25dntpmix引物含目的基因及dapdh上下游引物10pmol1l80微升001depc上下游引物分别加10微升taqdnapolymerase125units加入025微升三蒸水补足至25l1825微升001depc取出后暂放4冰箱保存 RT-PCR操作步骤 (2008/11/7整理,ZLJ) 原理:Trizol是由...
实时定量PCR(RT-qPCR)实验操作流程 一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,...
第二步 RT-PCR操作步骤 一、RNA逆转录cDNA(反应体系要20ul)依次加入 1、Oligo(dT)加入1ul。 2、RNA(体积即上一步骤计算出来的) 3、剩下的用无Rnase水补齐共12ul 65℃水浴5min。 二、加入逆转录试剂 1、5×Reaction Buffer 4ul 2、Ribolock RNase Inhibiter 1ul ...
RT-PCR操作步骤RT-PCR操作步骤(20 ul反应体系) 一、试剂准备 1 RNA提取试剂:Trizol 1.1氯仿 1.2异丙醇 1.3无水乙醇 1.4 0.1%DEPC水 2第一链cDNA合成试剂盒 3 PCR:荧光定量试剂盒 3.1目的基因引物 3.2内参基因引物 二、仪器、耗材 离心管、离心机、水浴锅、PCR管、电泳仪、凝胶图像分析系统、移液枪、离心管...
RT-PCR实验操作步骤 (转) 默认分类2007-12-25 17:51:05阅读233评论1字号:大中小订阅 一.所用试剂 1.0.01MPBS缓冲液,PH7.4 :高压灭菌,40C保存。临用前-200C放置30分钟,确保冰冷。 2.焦碳酸二乙酯(DEPC):sigma公司,40C保存。 3.0.1%DEPC处理的灭菌去离子水:100ml去离子水中加入0.1mlDEPC,剧烈振荡混匀...
RT-PCR扩增仪的操作步骤、操作步骤 主要通过选择键“< >”来确定执行的功能,用“PROCEED”输入所设定的各种参数,用“CANCEL”,取消输入或退回到前一步程序。以后各操作均如此,不再重复叙述。 (1)运行程序 当开机自检后仪器进入初始状态,显示如下: -Run Enter -Program Program 按PROEEED键,则显示如下: Run ...
RT–PCR的原理及实验步骤RT –PCR 一、RT –PCR的原理 RT -PCR即逆转录-聚合酶链反应。原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。 逆转录酶(reverse transcriptase)是存在于RNA病毒体内...
rtpcr操作有5个步骤。具体操作如下：1、总RNA提取。DEPC处理水溶解RNA，-20℃保存，备反转录之用。2、反转录。按下列组成调制反应液：样品总RNA 1μg；随机引物或oligo-dT(18-20) 100pmol；脱氧核苷三磷酸(每种dNTP各l0mmol／L) 1μl；反转录缓冲液(5×) 4μl；RNase抑制剂(20~40U...