RT-PCR操作步骤 RT-PCR步骤 一、总RNA提取 1. 取200mg组织，放到1.5mlEP管中，加入1mlTrizol剪碎。2. 震荡30s。3. 加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。4. 12000×g，4℃离心，15min。5. 吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。6. 加等体积异丙醇，-20℃，30min。7. 12000×g，4℃离心...
RT-PCR实验操作步骤 (转) 默认分类2007-12-25 17:51:05阅读233评论1字号:大中小订阅 一.所用试剂 1.0.01MPBS缓冲液,PH7.4 :高压灭菌,40C保存。临用前-200C放置30分钟,确保冰冷。 2.焦碳酸二乙酯(DEPC):sigma公司,40C保存。 3.0.1%DEPC处理的灭菌去离子水:100ml去离子水中加入0.1mlDEPC,剧烈振荡混匀...
1×RNAsafe30 ul(或1‰DEPC水30ul)溶解RNA沉淀,60℃水浴20min(注:用蒸馏水配置1/100的DEPC水高压后才能用,20×RNAsafe 用DEPC水稀释)测OD值定量RNA浓度(用DU800紫外光度计测量)如果提取的RNA不进行逆转录可在-80℃保存 第二步 RT-PCR操作步骤 一、RNA逆转录cDNA(反应体系要20ul)依次加入 1、Oligo(dT)加...
RT-PCR操作步骤按照顺序加入pcrststrandcdna以下配好后一起加入24微升10pcrbuffer25dntpmix引物含目的基因及dapdh上下游引物10pmol1l80微升001depc上下游引物分别加10微升taqdnapolymerase125units加入025微升三蒸水补足至25l1825微升001depc取出后暂放4冰箱保存 RT-PCR操作步骤 (2008/11/7整理,ZLJ) 原理:Trizol是由...
一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...
RT-PCR操作步骤RT-PCR操作步骤(20 ul反应体系) 一、试剂准备 1 RNA提取试剂:Trizol 1.1氯仿 1.2异丙醇 1.3无水乙醇 1.4 0.1%DEPC水 2第一链cDNA合成试剂盒 3 PCR:荧光定量试剂盒 3.1目的基因引物 3.2内参基因引物 二、仪器、耗材 离心管、离心机、水浴锅、PCR管、电泳仪、凝胶图像分析系统、移液枪、离心管...
Rt-PCR实验准备及与操作步骤 一、实验器具与材料: 1、移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头:1ml、200μl、20μl 3、匀浆管:5ml 4、吸头台:放置1ml吸头的一个,放置20μl吸头的一个 5、EP 管:1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶:2个6...
一步法与两步法RT-PCR 常用的反转录PCR方法有两步法(Two-step RT-PCR)和一步法(One-step RT-PCR)两种。两者的区别与特点如下表所示,本文将会以一步法RT-PCR为例,阐述反转录PCR的原理、操作步骤与实验要点。 2.实验原理 RT-PCR是一种从细胞RNA (mRNA)中高效灵敏地扩增cDNA序列的方法,它由两大步骤组成:一...
1、RT-PCR原理与实验操作步骤关键词:RT-PCR 逆转录酶 reversetranscriptase 聚合酶 链式反应 引物设计 DNA 聚合酶一、知识背景:1、基因表达:DNA RNA Protein单拷贝基因表达存在逐步放大机制,如一个蚕丝心蛋白基因 104个丝心蛋白mRNA(每个mRNA存活4d,可以合成105个丝心蛋白) 共合成109个丝心蛋白。因此单拷贝基因的...