【实验】普通PCR、荧光定量RT-qPCR、数字PCR的基本原理和操作方法,注意事项 19:05 【实验】原核表达系统设计全流程,大肠杆菌BL21(DE3),Rosetta,酵母,融合蛋白,诱导,信号肽,分泌类型,包涵体,启动子,标签选择位置,质粒 49:10 【实验】原核表达蛋白纯化操作原理,大肠杆菌,细胞破碎,蛋白标签,亲和层析, 33:00 报告...
实时定量反转录聚合酶链式反应(Real-Time Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chn Reaction,简称实时定量RT-PCR)是一种在DNA扩增过程中,通过荧光信号实时监测反应产物量的变化,从而得到起始模板量的分析方法。这种技术结合了反转录(RT)和聚合酶链式反应(PCR)两个过程,使得RNA模板也能进行定量分析。 实时定量RT...
RT-PCR数据分析方法(相对定量) 1.1.以质量单位作为标准进行相对定量 条件:要求准确地量化初始材料,如细胞数目或核酸的微克数。 当用相对定量法比较多个样本时,选择一个样本作为校验样本(Calibrator,即对照),所有样本目标基因的表达都以对照为标准上调或下调。通常用未处理作为对照。 用试验样品和对照样品的CT值来计算...
2.2 核酸提取:核酸提取可以采用公司的核酸提取或纯化试剂,操作方法按照说明书进行。 3.染料法 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行) 3.1如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做...
实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 是一种用于实时扩增和检测特定 DNA 或RNA 序列的分子生物学技术。该方法利用荧光染料或探针,当与扩增的 DNA 或RNA 分子结合时会发出信号,从而可以对目标序列进行量化。RT-qPCR 通常用于基因表达分析、病毒载量定量和基因突变检测等应用。 RT-qPCR原理的三个主要步骤: 1、反转录: 1...
如何选择绝对定量RT-PCR的数据统计分析方法？1. 根据正态性、方差齐性和样本量等因素选择合适的统计分析方法。2. 逆转录PCR（reverse transcription PCR），又称反转录PCR（RT-PCR），是PCR技术的一种重要应用形式。在此过程中，RNA模板被逆转录成cDNA，随后通过PCR进行扩增。3. 逆转录过程涉及将RNA单...
生物学小白不容错过~实时荧光定量PCR(Q-PCR)实验全流程(一)原理及实验设计讲解! 4.2万 12 2:32 App QPCR必备5|数据分析|CT值|扩增曲线|溶解曲线|特异性扩增|TM值| 1153 -- 3:43 App 【PCR基础知识】使用 SYBR® 绿色荧光染料出现多重峰时的处理方法 AskTaqman Ep.8 24.6万 90 5:38 App qPCR数据处...
师姐详解从PCR到qPCR实验流程(详解) 实时定量PCR(RT-qPCR)是一种利用荧光化学物质在每个聚合酶链式反应(PCR)循环后测量产物总量的方法,广泛应用于特定DNA序列的定量分析。以下是RT-qPCR的实验操作流程: 🔬 实验原理:Real-time PCR通过荧光信号实时监测PCR进程。在指数扩增阶段,模板的Ct值与起始拷贝数之间存在线性...
实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 是一种用于实时扩增和检测特定 DNA 或 RNA 序列的分子生物学技术。该方法利用荧光染料或探针,当与扩增的 DNA 或 RNA 分子结合时会发出信号,从而可以对目标序列进行量化。荧光定量PCR其本质是通过荧光探针或荧光DNA结合染料和实时荧光定量PCR仪器对PCR扩增产物进行检测和定量,仪器在PCR热...