RT-PCR原理及方法 09-10-15 精选2021版课件 1 背景 基因的表达 基因组DNA(genomicDNA)信使RNA(messengerRNA,mRNA)蛋白质产物 不同细胞或组织表达不同的基因 精选2021版课件 2 目的 通过反转录(reversetranscription,RT)和聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)的方法,检测目的基因在特定组织或细胞中、mRNA水平...
二、实时定量RT-PCR的基本原理 实时定量反转录聚合酶链式反应(Real-Time Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chn Reaction,简称实时定量RT-PCR)是一种在DNA扩增过程中,通过荧光信号实时监测反应产物量的变化,从而得到起始模板量的分析方法。这种技术结合了反转录(RT)和聚合酶链式反应(PCR)两个过程,使得RNA模板...
介绍RT-PCR的基本概念和应用领域。探索RT-PCR反转录的定义、原理和反转录酶的作用种类，以及常见的RNA提取方法。RT-PCR的基本步骤及流程 1 反转录 将RNA反转录成cDNA，利用反转录酶在 PCR反应体系的准备 2 适当的温度下合成DNA。准备包括DNA模板、引物、酶等必备物 质的PCR反应体系。3 扩增过程 通过PCR仪对DNA...
实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 是一种用于实时扩增和检测特定 DNA 或RNA 序列的分子生物学技术。该方法利用荧光染料或探针,当与扩增的 DNA 或RNA 分子结合时会发出信号,从而可以对目标序列进行量化。RT-qPCR 通常用于基因表达分析、病毒载量定量和基因突变检测等应用。 RT-qPCR原理的三个主要步骤: 1、反转录: 1...
1.取0.5 ml PCR管,依次加入下列试剂:第一链cDNA 2 μl;上游引物(10 pM)2 μl;下游引物(10 pM)2 μl;dNTP(2 mM) 4 μl;10×PCR buffer 5 μl;Taq 酶(2 u/μl)1 μl; 2.加入适量的ddH2O,使总体积达50 μl。轻轻混匀,离心; 3.设定PCR程序。在适当的温度参数下扩增28-32个循环。为了保证...
(messengerRNA,mRNA))蛋白质产物不同细胞或组织表达不同的基因33目的目的 通过反转录通过反转录(reversetranscription(reversetranscription,,RT)RT)和聚合酶链反应和聚合酶链反应(polymerasechain(polymerasechainreactionreaction,,PCR)PCR)的方法,检测目的基因在的方法,检测目的基因在特定组织或细胞中、特定组织或细胞中、...
RT-PCRRT-PCR:逆转录PCR,或者称反转录PCR(reversetranscription-PCR,RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。是一快速、简便、敏感性极高的检测RNA的方法。 RT-PCR的原理提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增...
ppt课件 1 主要内容 ◆人类细胞质RNA提取◆RT-PCR的原理、方法◆琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用 2019/11/8 ppt课件 2 人类细胞质RNA提取 ppt课件 3 提取总RNA 电泳 合成cDNA第 一链 PCR 2019/11/8 ppt课件 4 真核细胞RNA的种类 真核细胞总RNA主要由rRNA（80-85%）、tRNA和核内小分子RNA(10-15%)、...
聚合酶链式反应RT-PCR的原理使用特定的试剂和离心技术从细胞中提取RNA。提取RNA将RNA反转录成cDNA。反转录使用聚合酶链式反应技术扩增cDNA。扩增使用荧光染料或凝胶电泳检测扩增产物。检测RT-PCR的方法结果分析对扩增产物进行精确的定量和定性分析,确保结果的准确性和可靠性。避免交叉污染确保所有试剂和仪器清洁,避免扩增...