能够获得大量扩增产物,具有高特异性;通过添加loop引物,可以加快反应,缩短一半时间(常规LAMP反应大约需要1.0 h,加入loop引物后可缩短为0.5 h);扩增可产生大量的副产物焦磷酸镁白色沉淀,肉眼即可观察结果,也可借助于斑点杂交或横向流动试纸条等方法辅助结果检测。
这使得检测低拷贝数的样品具有挑战性,并降低了RT-LAMP技术的效率。 为了解决这个问题,我们猜测较少数量的LAMP引物将降低假阳性率,这是LAMP技术最常见的局限性。通常,通过增加酶的浓度或添加引物结合增强子(如盐酸胍GuHCl)来优化开发的比色和荧光测定的性能,可以提高扩增速率。在这项实验中,我们通过将五种引物与针对...
即4×102copies/μL,普通RT-PCR的检测限为9 pg/μL,即4×104copies/μL,荧光RT-LAMP方法的敏感性与qRT-PCR方法一致,是普通RT-PCR的100倍,说明荧光RT-LAMP的敏感性良好,且其敏感性高于其他学者对DTMUV建立的RT-LAMP方法。
HCV LAMP和HCV RT-LAMP表现出的假阳性稍逊,分别为10/100和9/100, 而 HCV RT-PCR 为0/100。 表1. 敏感性和特异性的分析 检测时间 对于不同的HCV基因型和不同的病毒载量,HCV LAMP和HCV RT-LAMP检测阳性的检测时间略有不同,不过绝大多数都能控制在30分钟之内。 图1. HCV基因型和病毒载量对于检测时间的...
荧光环介导逆转录等温扩增(RT-LAMP)技术.PDF,2012 29 12 23 中国动物检疫 年第 卷第 期 - - 本栏目主持人:胡藕祥 zgdwjy@ 荧光环介导逆转录等温扩增(RT-LAMP )技术 在病毒性出血性败血症(VHS)诊断中的应用 1 2 2 2 安元龙 ,吴斌 ,林长军 ,肇慧君 1. 1160
逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术检测仙台病毒的方法构建主要包括如下几个 步骤:引物设计与筛选;体系优化;试剂配置;特异性、灵敏性及符合性实验。引物设计 方面本研究从在NCBI下载仙台病毒(GI:9627219)全基因组,选择较为保守的融合蛋白 (FusionProtein,FP)基因作为靶基因,与多种突变株FP基因进行比对,确定高度保守...
利用RT-LAMP可视化检测技术检测N1亚型禽流感病毒彭宜 谢芝勋 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 范晴 罗思思广西兽医研究所,广西南宁530001 前言根据A型流感病毒表面糖蛋白( Hemaggl uti ni n,HA)和神经氨酸酶(Neurami ni dase,NA)的抗原性不同,禽流感病毒( AIV)可进一步分为不同的亚型,目前已发现有16种HA...
环介导逆转录等温扩增技术( RT-LAMP )在丙型肝炎 病毒基因检测中的应用 李启明 1 ,马学军 1 , 2 ,周蕊 1 ,彭夫望 1 ,高寒春 2 ,匡治州 1 ,侯云德 1 , 2 ( 1. 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,北京 100052 ; 2. 北京金迪克生物技术研究所,北京 100176 ) 摘要:该文介绍了一种便捷、灵敏...
建立一种便捷,灵敏的检测方法,即逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT—LAMP)用于H5N1亚型禽流感病毒基因检测.该技术使用特异对应于靶序列中8个基因区段的6条特异引物,在等温条件下进行核酸扩增反应.对51份实验感染动物及病毒培养标本的H5N1亚型禽流感病毒的HA,NA基因区进行了RT—LAMP检测,并以SYBR Green I为反应指示剂...
逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术检测仙台病毒的方法构建主要包括如下几个 步骤:引物设计与筛选;体系优化;试剂配置;特异性、灵敏性及符合性实验。引物设计 方面本研究从在NCBI下载仙台病毒(GI:9627219)全基因组,选择较为保守的融合蛋白 (Fusion Protein,FP)基因作为靶基因,与多种突变株FP基因进行比对,确定高度保守...